QB/T 8137-2025 水产品中牛磺酸的测定

　　ICS 67.050CCSX04

　　中华人民共和国轻工行业标准

　　QB/T 8137-2025

　　水产品中牛磺酸的测定

　　Determinationoftaurineinaquaticproducts

　　2025-04-10发布2025-11-01实施

　　中华人民共和国工业和信息化部 发布

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件由中国轻工业联合会提出。

　　本文件由全国食品工业标准化技术委员会(SAC/TC64)归口。

　　本文件起草单位：广东省食品工业研究所有限公司(国家轻工业食品质量监督检测广州站)、国检测试控股集团(安徽)拓维检测服务有限公司、广西民生中检联检测有限公司、捷通(广州)检测技术服务有限公司、江苏广海检验检测有限公司、翁源广业清怡食品科技有限公司、广东规正质量检测有限公司、中国地质调查局牡丹江自然资源综合调查中心、无锡市食品安全检验检测中心、东莞市南北检测认证技术有限公司、深圳中检联检测有限公司。

　　本文件主要起草人：陈茹、吕伯龙、黄群芳、刘春丽、黄柳霞、黄振江、胡桂平、王斐、杨楠、顾晔、何晓军、罗慈婷、柯洋洋、孙震、陈汉峰、周翠翠、吴广亮、吴孔友、陈明哲、黄韡、伦麒景、庄俊钰、陈楚莹、周景梁、马婷。

　　本文件为首次发布。

　　水产品中牛磺酸的测定

　　1范围

　　本文件描述了两种水产品中牛磺酸含量的测定方法，氨基酸自动分析仪法和高效液相色谱法。

　　本文件适用于鱼、虾、贝类等水产品中牛磺酸的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 30891 水产品抽样规范

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4方法

　　4.1 第一法 氨基酸自动分析仪法

　　4.1.1 原理

　　试样中牛磺酸经水超声提取，乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白，经过滤后注入氨基酸自动分析仪分离，与茚三酮溶液产生颜色反应，通过可见分光光度检测器，外标法定量。

　　4.1.2 试剂

　　除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

　　4.1.2.1 盐酸(HCl)：质量分数不小于36%。

　　4.1.2.2 柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)：优级纯。

　　4.1.2.3 氢氧化钠(NaOH)。

　　4.1.2.4 氯化钠(NaCl)：优级纯。

　　4.1.2.5 柠檬酸(C6H8O7·H2O)：优级纯。

　　4.1.2.6 无水乙醇(C2H5OH)：色谱纯。

　　4.1.2.7 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。

　　4.1.2.8 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O] 。

　　4.1.2.9 茚三酮(C9H4O3·H2O)。

　　4.1.2.10乙二醇甲醚(C3H8O2)。

　　4.1.2.11无水乙酸钠(C2H3NaO2)。 4.1.2.12硼氢化钠(NaBH4)。

　　4.1.3 试剂配制

　　4.1.3.1 盐酸溶液(6 mol/L)：取500 mL 盐酸加水稀释至1 000mL，混匀。

　　4.1.3.2 盐酸溶液(0.02 mol/L)：取 1.67 mL 盐酸加水稀释至1 000 mL，混匀。

　　4.1.3.3 亚铁氰化钾溶液(150g/L)：称取15g 亚铁氰化钾，用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3 个月内保持稳定。

　　4.1.3.4 乙酸锌溶液(300g/L)：称取30g乙酸锌，用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3 个月内保持稳定。

　　4.1.4 流动相的配制

　　4.1.4.1 流动相B1 配制：称取柠檬酸钠7.30 g、氯化钠5.66 g、柠檬酸19.80 g 溶于水中，转入1 000 mL容量瓶，再加入135 mL 无水乙醇，用水定容，用0.45 μm 水相滤膜过滤。

　　4.1.4.2 流动相B2 配制：称取柠檬酸钠7.74 g、氯化钠7.07 g、柠檬酸22.00 g 溶于水中，转入1 000 mL容量瓶，再加入25 mL 无水乙醇，用水定容，用0.45 μm 水相滤膜过滤。

　　4.1.4.3 流动相B3 配制：称取柠檬酸钠13.31 g、氯化钠3.74 g、柠檬酸12.8 g 溶于水中，转入1 000mL容量瓶，再加入9 mL 无水乙醇，用水定容，用0.45 μm 水相滤膜过滤。

　　4.1.4.4 流动相B6 配制：称取氢氧化钠8.00g 溶于水中，转入1000mL 容量瓶，再加入100mL无水乙醇用水定容，用0.45 μm 水相滤膜过滤。

　　4.1.5 茚三酮溶液配制

　　4.1.5.1 反应液R1 配制：称取茚三酮39.0 g 溶于979 mL乙二醇甲醚中，超声溶解5 min，过0.45μm有机相滤膜过滤，上机氮气鼓泡5 min，加入81 mg～85 mg 硼氢化钠，氮气鼓泡30 min。

　　4.1.5.2 反应液R2 配制：称取无水乙酸钠204.0 g，加入300 mL 水溶解，转移至1000mL容量瓶，再加入123 mL 冰乙酸，401 mL乙二醇甲醚，加水定容。过0.45μm 有机相滤膜过滤，氮气鼓泡15 min。

　　4.1.5.3 反应液R3 配制：准确移取无水乙醇50 mL 至1 000 mL容量瓶，用水定容至1000 mL，混匀后过0.45μm 有机相滤膜过滤。

　　4.1.6 标准品

　　牛磺酸(C2H7NO3S，CAS 号：107-35-7)，纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

　　4.1.7 标准溶液制备

　　4.1.7.1 牛磺酸标准储备溶液：准确称取牛磺酸(4.1.6)0.1000 g 至100 mL 容量瓶中，用水溶解并定容，即配制成含牛磺酸1 000 μg/mL的储备液，于2 ℃~8 ℃保存，有效期3 个月。

　　4.1.7.2 牛磺酸标准工作溶液：将牛磺酸标准储备液(4.1.7.1)用水稀释制备一系列标准溶液，标准系列质量浓度为0μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL，临用前现配。

　　4.1.8 材料

　　微孔滤膜：0.22 μm，水相;0.45 μm，有机相;0.45 μm，水相。

　　4.1.9 仪器和设备

　　4.1.9.1 氨基酸自动分析仪：配备双通道可见光检测器、六元梯度分离系统和三元反应液输送系统。 4.1.9.2 分析天平：感量0.001 g 和0.0001 g。

　　4.1.9.3 超声波清洗仪：温度范围10 ℃~80 ℃。

　　4.1.9.4 涡旋混合器：最高转速不低于500 r/min。

　　4.1.9.5 离心机：最高转速不低于5 000 r/min。

　　4.1.10 分析步骤

　　4.1.10.1试样的制备

　　按GB/T 30891中养殖及捕捞水产品的试样制备的要求制样，取均质后的供试样品，作为供试试样。

　　4.1.10.2试样的提取

　　称取0.5 g～2 g试样(精确至0.001g)于锥形瓶中，加入40 ℃左右温水40 mL，涡旋混匀1min使试样分散，40℃超声20min，冷却至室温后，分别加入1mL乙酸锌溶液和1 mL亚铁氰化钾溶液，涡旋混匀，转入100 mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀，样液于5 000 r/min离心10 min，取上清液经0.22 μm水相微孔滤膜过滤，待测。

　　4.1.11 色谱参考条件

　　4.1.11.1色谱柱：磺酸型阳离子树脂色谱柱(4.6mm×60mm，3 μm)。

　　4.1.11.2进样体积：20 µL。

　　4.1.11.3检测波长：570 nm。

　　4.1.11.4反应器温度：135 ℃。

　　4.1.11.5流动相、泵流速及柱温梯度参考条件见表1。

　　表1 梯度洗脱条件

　　时间/min B1/(%) B2/(%) B3/(%) B6/(%) 流速/

　　(mL/min) 温度

　　/℃ R1/

　　(%) R2/

　　(%) R3/

　　(%) 流速/(mL/min) 0.0 100 0 0 0

　　0.400 57 50 50 0

　　0.350 1.5 100 0 0 0 57 50 50 0 1.6 0 100 0 0 57 50 50 0 5.8 0 100 0 0 57 50 50 0 5.9 0 0 100 0 57 50 50 0 6.5 0 0 100 0 68 50 50 0 11.5 0 0 100 0 57 50 50 0 12.6 0 0 100 0 57 50 50 0 12.7 0 0 0 100 57 50 50 0 12.8 0 0 0 100 57 50 50 0 12.9 0 0 0 100 57 0 0 100 13.8 0 0 0 100 57 0 0 100 表1(续)

　　时间/min B1/(%) B2/(%) B3/(%) B6/(%) 流速/

　　(mL/min) 温度

　　/℃ R1/

　　(%) R2/

　　(%) R3/

　　(%) 流速/(mL/min) 13.9 0 100 0 0

　　0.400 57 0 0 100

　　0.350 14.8 0 100 0 0 57 0 0 100 14.9 100 0 0 0 57 0 0 100 17.8 100 0 0 0 57 0 0 100 17.9 100 0 0 0 57 50 50 0 37.1 100 0 0 0 57 50 50 0

　　4.1.12 标准曲线的的制作

　　将标准系列工作液分别注入氨基酸自动分析仪中，测定相应的色谱峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标，以响应值(峰面积)为纵坐标，绘制标准曲线。

　　4.1.13 试样溶液的测定

　　牛磺酸标准工作溶液(4.1.7.2)和试液(4.1.10.2)分别进样，得到响应值(峰面积)，根据标准曲线得到待测液中牛磺酸的质量浓度。牛磺酸标准溶液色谱图见附录A.1。

　　4.1.14 分析结果的表述

　　试样中牛磺酸的含量按公式(1)计算。

　　X ƒ…………………………(1)

　　式中：

　　X——试样中牛磺酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　p——试样测定液中牛磺酸的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　V——定容体积，单位为毫升(mL);

　　m——样品称样量，单位为克(g);

　　ƒ——试样稀释的倍数;

　　1000——换算系数;

　　结果保留三位有效数字。

　　4.1.15 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10%。

　　4.1.16 方法检出限和定量限

　　当取样量为0.5 g时，检出限(LOD)为60mg/kg定量限(LOQ)为180mg/kg。 4.2 第二法 高效液相色谱法

　　4.2.1 原理

　　试样中牛磺酸经水超声提取，乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白，样液经丹磺酰氯衍生处理后，反相液相色谱柱分离，用紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。

　　4.2.2 试剂

　　除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。

　　4.2.2.1乙腈(C2H3N)：色谱纯。

　　4.2.2.2 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O] 。

　　4.2.2.3 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。

　　4.2.2.4 盐酸(HCl)。

　　4.2.2.5 冰乙酸(CH3COOH)。

　　4.2.2.6 乙酸钠(CH3COONa)。

　　4.2.2.7 无水碳酸钠(Na2CO3)。

　　4.2.2.8 盐酸甲胺(CH6ClN)。

　　4.2.2.9 丹磺酰氯(C12H12ClNO2S)：色谱纯。

　　注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定，在干燥器中避光保存。

　　4.2.3 试剂配制

　　4.2.3.1 乙酸锌溶液(300g/L)：称取30g乙酸锌，用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3 个月内保持稳定。

　　4.2.3.2 亚铁氰化钾溶液(150g/L)：称取15g 亚铁氰化钾，用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3 个月内保持稳定。

　　4.2.3.3 盐酸溶液(1mol/L)：吸取9 mL盐酸，用水稀释并定容至100 mL。

　　4.2.3.4 碳酸钠缓冲液(pH 9.5)(80 mmol/L)：称取0.424 g 无水碳酸钠，加40 mL水溶解，用1 mol/L盐酸溶液调pH 至9.5，用水定容至50 mL。该溶液在室温下3 个月内稳定。

　　4.2.3.5 丹磺酰氯溶液(1.5 g/L)：称取0.15 g 丹磺酰氯，用乙腈溶解并定容至100 mL。临使用前配制。

　　4.2.3.6 盐酸甲胺溶液(20 g/L)：称取2 g 盐酸甲胺，用水溶解并定容至100 mL。该溶液保存在4 ℃下3 个月内稳定。

　　4.2.3.7 乙酸钠缓冲溶液(10 mmol/L，pH4.2)：称取0.820 g乙酸钠，加800 mL水溶解，用冰乙酸调节pH 至4.2，用水定容至1 000 mL，经0.45 μm 水相滤膜过滤。

　　4.2.4 标准品

　　牛磺酸(C2H7NO3S，CAS 号：107-35-7)，纯度不小于99%或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

　　4.2.5 标准溶液配制

　　4.2.5.1 牛磺酸标准储备溶液：准确称取牛磺酸(4.2.4)0.1000g 至100mL 容量瓶中，用水溶解并定容，即配制成含牛磺酸1 000 μg/mL的储备液，于2℃~8℃保存，有效期3 个月。 4.2.5.2 牛磺酸标准工作溶液：将牛磺酸标准储备液用水稀释至质量浓度为 0 μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20 μg/mL、50μg/mL的标准使用液，临用前现配。

　　4.2.6 材料

　　微孔滤膜：0.22 μm，有机相;0.45 μm，水相。

　　4.2.7 仪器和设备

　　4.2.7.1 高效液相色谱仪：带紫外检测器或二极管阵列检测器。

　　4.2.7.2 分析天平：感量0.001 g 和0.0001 g。

　　4.2.7.3 超声波清洗仪：温度范围10 ℃~80 ℃。

　　4.2.7.4 涡旋混合器：最高转速不低于500 r/min。

　　4.2.7.5 离心机：最高转速不低于5 000 r/min。

　　4.2.8 分析步骤

　　4.2.8.1 试样的制备

　　按GB/T 30891中养殖及捕捞水产品的试样制备的要求制样，取均质后的供试样品，作为供试试样。

　　4.2.8.2 试样的提取

　　4.2.8.2.1 试液提取

　　称取0.5g～2g 试样(精确至0.001g)于锥形瓶中，加入40℃左右温水40mL，涡旋混匀1min使试样分散，40 ℃超声20 min，冷却至室温后，分别加入1 mL乙酸锌溶液和1 mL 亚铁氰化钾溶液，涡旋混匀，转入100 mL 容量瓶，加水定容至刻度，混匀，样液于5 000 r/min离心10 min，取上清液待用。当样品含量过高时，需在衍生前根据实际浓度适当稀释至线性范围内，再进行衍生操作，避免衍生不完全。

　　4.2.8.2.2 试液衍生处理

　　分别取1 mL 样液和1 mL 各标准使用液至10 mL比色管，加入1mL碳酸钠缓冲液，1mL丹磺酰氯溶液，充分混匀，室温下避光衍生2 h 后，加入0.1 mL 盐酸甲胺溶液混匀，终止反应。样液经0.22μm有机微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。

　　4.2.8.3 测定

　　4.2.8.3.1 色谱参考条件

　　4.2.8.3.2 色谱柱：C18(4.6mm×250mm，5 µm)，或具有同等性能的色谱柱。

　　4.2.8.3.3 柱温：30 ℃。

　　4.2.8.3.4 进样体积：20 µL。

　　4.2.8.3.5 流速：1.0 mL/min。

　　4.2.8.3.6 流动相：乙腈+0.01 mol/L乙酸钠溶液(乙酸调pH 至4.2)=30 ∶70(体积比)。

　　4.2.8.3.7 检测波长：254 nm。 4.2.9 标准曲线的的制作

　　将标准系列工作液的衍生液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的色谱峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标，以响应值(峰面积)为纵坐标，绘制标准曲线。

　　4.2.10 测定

　　将试样溶液(4.2.8.2.2)注入高效液相色谱仪中，得到响应值(峰面积)，根据标准曲线得到待测液中牛磺酸的质量浓度。牛磺酸标准溶液色谱图见附录A.2。

　　4.2.11 结果计算和表述

　　试样中牛磺酸的含量按公式(2)计算。

　　X =׃ …………………………(2)

　　式中：

　　X——试样中牛磺酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　p——试样测定液中牛磺酸的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　V——定容体积，单位为毫升(mL);

　　m——样品称样量，单位为克(g);

　　ƒ——试样稀释的倍数;

　　1000——换算系数;

　　结果保留三位有效数字。

　　4.2.12 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10%。

　　4.2.13 方法检出限和定量限

　　当取样量为0.5 g时，检出限(LOD)为50 mg/kg，定量限(LOQ)为150mg/kg。

　　附录A

　　(资料性)

　　色谱图

　　A.1 氨基酸自动分析法色谱图见图A.1。

　　150

　　100

　　50

　　0

　　05 1015202530t/min

　　a)标准溶液色谱图 150

　　100

　　50

　　0

　　0 5 10 15 20 25 30t/min

　　b)试样色谱图

　　图A.1 氨基酸自动分析法色谱图 A.2 高效液相法色谱图见图A.2。

　　1600

　　1200

　　800

　　400

　　0

　　02468101214

　　1500

　　1000

　　500

　　0

　　a)标准溶液色谱图

　　0 2 4 6t/min8 10 12 14

　　b)试样色谱图

　　图A.2 高效液相色谱法色谱图

　　A.3 高效液相法光谱图见图A.3。

　　700

　　600

　　500

　　400

　　300

　　200

　　100

　　0

　　200 250 300350 400

　　nm

　　图A.3 高效液相色谱法牛磺酸光谱图