QB/T 8138-2025 青梅及青梅制品中有机酸测定方法

　　ICS 67.080.10CCSY 04

　　中华人民共和国轻工行业标准

　　QB/T 8138-2025

　　青梅及青梅制品中有机酸测定方法

　　Determination method oforganic acids in green plum andproducts

　　2025-04-10发布2025-11-01实施

　　中华人民共和国工业和信息化部 发布

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件由中国轻工业联合会提出。

　　本文件由全国食品工业标准化技术委员会(SAC/TC64)归口。

　　本文件起草单位：溜溜果园集团股份有限公司、安徽工匠质量标准研究院有限公司、广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所、安徽中农安检验检测中心有限公司、厦门市标准化研究院、中轻食品工业管理中心、东莞市南北检测认证技术有限公司、安徽溜溜梅研究院有限公司、安徽省产品质量监督检验研究院、安徽瑞谱检测技术有限公司、广东省农业科学院农业质量标准农产与检测技术研究所、江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所、合肥工业大学、安徽国泰众信检测技术有限公司、安徽省质量和标准化研究院、合肥增财智能科技有限公司、安徽工业技术创新研究院、内蒙古自治区产品质量检验研究院、阜阳市产品质量监督检验研究所。

　　本文件主要起草人：杨帆、丁智宇、胡燕、曹荣升、邹波、洪丽君、余元善、高鹏、李洋、何晓军、徐荣莽、娄鹏祥、项威、王威利、魏益华、魏兆军、张媛、闵芳、朱宏成、刘瓒、阮少龙、庞文婷、贺诗词、吴玲芝。

　　本文件为首次发布。

　　青梅及青梅制品中有机酸测定方法

　　1范围

　　本文件描述了青梅及青梅制品中柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素和熊果酸的测定方法。

　　本文件适用于青梅以及以青梅类原料所制成的蜜饯、果冻、果酱、糖果、饮料、配制酒、水果罐头和食品工业用浓缩液(汁、浆)中11种有机酸的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T8855 新鲜水果和蔬菜取样方法

　　GB 5009.157 食品安全国家标准 食品中有机酸的测定

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　青梅制品 green plum products

　　以青梅类原料所制成的蜜饯、果冻、果酱、糖果、饮料、配制酒、水果罐头和食品工业用浓缩液(汁、浆)。

　　4原理

　　试样用水或甲醇或酸性甲醇提取后，经强阴离子交换固相萃取柱净化，经反向色谱柱分离，以保留时间定性，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

　　5.1试剂

　　5.1.1乙腈(CH3CN)：色谱纯。

　　5.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。

　　5.1.3 乙醇(CH3CH2OH)：色谱纯。

　　5.1.4 磷酸(H3PO4)：色谱纯。 5.1.5 乙酸(CH3COOH)：色谱纯。

　　5.1.6 氨水(NH3OH)：色谱纯。

　　5.1.7 浓盐酸(HCl)：质量分数36%。

　　5.2 试剂配置

　　5.2.1 提取剂：甲醇+水+盐酸=80+19+1(体积比)，取800 mL甲醇、190 mL 水和10 mL 盐酸，混匀。

　　5.2.2 磷酸溶液(0.1%)：量取磷酸1.0 mL，加水定容至1 000 mL。

　　5.2.3 磷酸-甲醇溶液(2%)：量取磷酸20.0 mL，加甲醇定容至1 000 mL。

　　5.2.4 乙酸溶液(0.4%)：量取乙酸4 mL，加水定容至1 000 mL。

　　5.2.5 氨水溶液(0.1%)：准确吸取1.0 mL 氨水，加入800 mL 纯水，磷酸调pH 至7.5，加水定容至1000 mL。

　　5.3 标准品

　　5.3.1 柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸标准品：纯度≥99%。

　　5.3.2 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素、熊果酸标准品：纯度≥98 %。

　　5.4 标准溶液配制

　　5.4.1 标准储备液：分别称取柠檬酸、苹果酸、丁二酸和乳酸(精确到0.1 mg)，用水溶解，配成质量浓度为柠檬酸50 000μg/mL、苹果酸50 000 μg/mL、丁二酸125 000μg/mL、乳酸50 000μg/mL的标准储备液;分别称新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、 p-香豆酸、梅素和熊果酸等 7 种标准品各5 mg(精确到0.1 mg)，用甲醇溶解并定容至5 mL，配成1 000μg/mL的标准储备溶液，在-20 ℃保存。该标准储备液有效期为12 个月，超期不应使用。

　　5.4.2 混合标准液：柠檬酸、苹果酸、丁二酸和乳酸的标准混合液按照GB5009.157 配制;准确吸取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素等6 种标准储备液0.2 mL，用甲醇稀释成10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的混合标准液，现用现配;准确吸取熊果酸溶液0.2mL，用甲醇稀释成20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的熊果酸标准工作液。

　　5.5 材料

　　5.5.1 有机相微孔滤膜：滤膜孔径0.22 μm。

　　5.5.2 水相微孔滤膜：滤膜孔径0.22 μm。

　　6 仪器和设备

　　6.1 高效液相色谱仪：配置二极管阵列检测器(DAD)或具有双波长的紫外检测器。

　　6.2电子分析天平：感量0.1 mg。

　　6.3 粉碎机。

　　6.4 组织捣碎机。

　　6.5 超声波清洗器。

　　6.6 真空抽滤装置。

　　6.7 离心机：可达到5 000 r/min以上。 7 试样的制备

　　7.1 青梅及青梅固态制品试样：按GB/T 8855的规定取样，四分法称取250 g，将可食部分切碎，立即用液氮冷冻，粉碎机粉碎，备用。

　　7.2 青梅液态制品试样：直接混匀备用。

　　7.3 青梅果冻、罐头制品试样：放入组织捣碎机中匀浆后备用。

　　8分析步骤

　　8.1 提取液制备

　　8.1.1 柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸的提取

　　8.1.1.1 澄清型青梅液态制品试样提取应按照GB 5009.157果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料进行。

　　8.1.1.2 其他青梅或青梅制品试样提取应按照GB 5009.157果冻、水果罐头进行。

　　8.1.2 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素的提取

　　8.1.2.1 澄清型青梅液态制品试样：准确称取10.0 g(精确到0.1 g)，用酸性甲醇提取剂定容至100 mL，过0.22 μm有机微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪分析。

　　8.1.2.2 其他青梅或青梅制品试样：准确称取10.0 g(精确到0.1 g)，加入30 mL酸性甲醇提取剂，混匀，室温下超声提取15min，5 000 r/min离心10 min，上清液转入100 mL棕色容量瓶，残渣再用30 mL酸性甲醇提取剂，按上述步骤重复提取2次，合并3次提取液，用酸性甲醇提取剂定容至100 mL，过0.22 μm有机微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪分析。

　　8.1.3 熊果酸的提取

　　8.1.3.1 澄清型青梅液态制品试样：准确称取10.0 g(精确到0.1 g)，用甲醇定容至100mL，过0.22 μm有机微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪分析。

　　8.1.3.2 其他青梅或青梅制品试样：准确称取10.0 g(精确到0.1g)，加入30 mL甲醇，混匀，室温下超声提取15min，5000r/min离心10min，上清液转入100mL棕色容量瓶，残渣再用30mL甲醇，按上述步骤重复提取2次，合并3次提取液，用甲醇定容至100 mL，过0.22μm有机微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪分析。

　　8.2 色谱条件

　　8.2.1 柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸色谱条件

　　柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸的色谱条件按照GB 5009.157进行。

　　8.2.2 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素色谱条件

　　8.2.2.1 色谱柱：亲水性AQ-C18色谱柱，柱长250 mm，内径4.6mm，粒度5µm;或性能相当的色谱柱。

　　8.2.2.2 色谱柱温：30 ℃。

　　8.2.2.3 流动相：A相为0.4%乙酸溶液;B相为乙腈。

　　8.2.2.4 流动相流速：0.4 mL/min。

　　8.2.2.5 洗脱方式：梯度洗脱。

　　8.2.2.6 检测波长：280 nm;320 nm。

　　8.2.2.7 进样量：10µL。 8.2.2.8 梯度洗脱条件见表1。

　　表1 高效液相色谱梯度洗脱条件

　　时间/min 流动相A(0.4%乙酸溶液)/(%) 流动相B(乙腈)/(%) 0 97 3 8 95 5 40 80 20 50 65 35 55 50 50 60 50 50 61 97 3 70 97 3 8.2.3 熊果酸色谱条件

　　8.2.3.1 色谱柱：C18色谱柱，柱长250 mm，内径4.6 mm，粒度5 µm;或性能相当的色谱柱。

　　8.2.3.2 色谱柱温：30 ℃。

　　8.2.3.3 流动相：A 相为0.1%氨水溶液，磷酸调节pH 至7.5;B 相为乙腈。

　　8.2.3.4 流动相流速：1.0 mL/min。

　　8.2.3.5 洗脱方式：等度洗脱。

　　8.2.3.6 检测波长：210 nm。

　　8.2.3.7 进样量：10µL。

　　8.2.3.8 等度洗脱条件：A 相30%，B 相70%。

　　8.3 标准曲线制作

　　在8.2液相色谱条件下测定系列浓度的柠檬酸、苹果酸、丁二酸和乳酸混合标准液，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸和梅素混合标准液，熊果酸标准液，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

　　8.4 试样测定

　　取10 µL试样提取液进样分析，以保留时间定性，外标法定量。

　　9 结果计算与表述

　　试样中柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素和熊果酸含量(X)以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算：

　　X …………………………(1)

　　式中：

　　X——试样中各化合物的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　ρs——标准工作曲线上计算得到的各化合物的浓度，单位为毫克每升(mg/L);

　　V——待测试样最终定容体积，单位为毫升(mL);

　　f——定容后稀释的倍数;

　　m——试样质量，单位为克(g)。 10精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。

　　11 检出限与定量限

　　11.1 检出限

　　当取样量为10 g，定容体积为100 mL时，青梅以及以青梅类原料所制成蜜饯、果冻、果酱、糖果、饮料、配制酒、水果罐头中11种有机酸检出限为：柠檬酸250 mg/kg、苹果酸500 mg/kg、丁二酸

　　1 250 mg/kg、乳酸250 mg/kg、新绿原酸5 mg/kg、绿原酸5 mg/kg、隐绿原酸5 mg/kg、咖啡酸5mg/kg、

　　p-香豆酸5 mg/kg、梅素5 mg/kg、熊果酸5 mg/kg。

　　11.2 定量限

　　当取样量为10 g，定容体积为100 mL时，青梅以及以青梅类原料所制成蜜饯、果冻、果酱、糖果、饮料、配制酒、水果罐头中11种有机酸定量限为：柠檬酸250mg/kg、苹果酸500 mg/kg、丁二酸1 250 mg/kg、乳酸250 mg/kg、新绿原酸10 mg/kg、绿原酸10 mg/kg、隐绿原酸10 mg/kg、咖啡酸10 mg/kg、p-香豆酸 10 mg/kg、梅素10 mg/kg、熊果酸10mg/kg。

　　附录A

　　(资料性)

　　有机酸的高效液相色谱图和保留时间

　　A.1 高效液相色谱图

　　A.1.1 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸高效液相色谱图见图A.1。

　　标引序号说明：

　　1——新绿原酸;

　　2——绿原酸;

　　3——隐绿原酸;

　　4——咖啡酸;

　　5——p-香豆酸。

　　图A.1 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸的高效液相色图谱A.1.2 梅素的高效液相色谱图见图A.2。

　　图A.2 梅素的高效液相色图谱

　　A.1.3 熊果酸的高效液相色谱图见图A.3。

　　熊果酸

　　图A.3 熊果酸的高效液相色图谱

　　A.2 保留时间

　　新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、梅素和熊果酸的保留时间见表A.1。

　　表A.1 保留时间

　　序号 组分名称 保留时间/min 标准溶液/(mg/L) 检测波长/nm 1 新绿原酸 28.965 60 320 2 绿原酸 35.521 60 320 3 隐绿原酸 37.137 60 320 4 咖啡酸 39.371 60 320 5 p-香豆酸 48.636 60 320 6 梅素 37.586 60 280 7 熊果酸 13.421 40 210