DB1302/T 318-2011 水产品中孔雀石绿的快速测定 酶联免疫吸附法
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- 标准类型：食品地方标准
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-06-07
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资料介绍
DB1302/T 318-2011《水产品中孔雀石绿的快速测定酶联免疫吸附法》主要内容总结
1. 标准概述
- 标准性质：唐山市地方标准（DB1302/T），发布于2011年，规定了水产品中孔雀石绿残留量的酶联免疫吸附测定方法（ELISA）。
- 适用范围：适用于水产品中孔雀石绿的快速筛查检测，阳性结果需进一步确证。
- 起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。
2. 规范性引用文件
- 引用GB/T 6682《分析实验室用水规则和试验方法》，明确实验用水需符合二级水标准。
3. 样品制备与保存
- 制样：取新鲜或解冻水产品组织，剪碎后高速匀浆。
- 保存：匀浆后样品需在-20℃冰箱中贮存备用。
4. 测定方法
4.1 方法原理
- 竞争性ELISA：样品中孔雀石绿与酶标记物竞争结合抗体，通过测定450nm吸光度值，其与孔雀石绿浓度自然对数成反比，与标准曲线比较计算残留量。
4.2 试剂与材料
- 关键试剂：
- 孔雀石绿检测试剂盒（2~8℃保存）。
- 乙腈（提取溶剂）、中性氧化铝（100~200目，用于净化）。
- 实验用水：符合GB/T 6682二级水标准。
4.3 仪器设备
- 酶标仪（450nm滤光片）、均质器、离心机（4000r/min）、氮吹仪、微量移液器（单道/多道）、恒温培养箱等。
4.4 样品提取步骤
- 均质与萃取：5g样品加10mL乙腈振荡离心。
- 净化：加入3g中性氧化铝离心，取上清液氮吹浓缩。
- 复溶与稀释：复溶后静置，稀释20倍后取120μL上清液检测。
4.5 测定流程
- 孵育：标准品/样品与酶标记物混合，避光孵育30分钟。
- 洗涤：多次冲洗微孔板并拍干。
- 显色与终止：加入底物孵育30分钟后加终止液。
- 读数：450nm波长下测定吸光度。
5. 结果计算与判定
- 计算公式：百分吸光度值（%）=（样本吸光度/空白吸光度）×100%。
- 标准曲线：以标准品浓度对数 vs. 百分吸光度绘制曲线，计算样本浓度。
- 阳性处理：筛查阳性样本需用确证方法（如HPLC-MS）进一步验证。
6. 方法性能参数
- 灵敏度：0.005 μg/kg（可检测的最低响应浓度）。
- 检测限（LOD）：0.5 μg/kg（实际样品中可检出的最低浓度）。
- 回收率：≥66.2%（方法准确性指标）。
7. 其他说明
- 关键步骤：样品净化（中性氧化铝）、氮吹浓缩、孵育时间控制。
- 注意事项：
- 试剂盒需回温至室温（19~25℃）后使用。
- 洗涤步骤需彻底，避免交叉污染。
- 结果需结合标准曲线和稀释倍数计算。
总结：该标准提供了一种基于ELISA技术的孔雀石绿快速筛查方法，适用于水产品安全监测，具有操作简便、灵敏度高的特点，但需注意阳性样本的确证要求。