NY/T 4685-2025 混合型饲料添加剂酸度调节剂中有机酸的测定 高效液相色谱法

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4685-2025 主要内容总结

​​1. 标准基本信息​​

• ​​标准名称​​：混合型饲料添加剂酸度调节剂中有机酸的测定 高效液相色谱法
• ​​编号​​：NY/T 4685-2025
• ​​发布日期​​：2025年1月9日
• ​​实施日期​​：2025年5月1日
• ​​归口单位​​：全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）
• ​​起草单位​​：四川威尔检测技术股份有限公司、通威农业发展有限公司等。

​​2. 适用范围​​

• ​​检测对象​​：混合型饲料添加剂酸度调节剂中的有机酸及其盐（苯甲酸和山梨酸仅检测酸形式）。
• ​​适用剂型​​：粉末型、颗粒型、液体型、脂肪酸酯包被型。
• ​​检测有机酸种类​​：
  • ​​常规酸​​：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸（包括盐形式）。
  • ​​特殊酸​​：富马酸（盐形式）、苯甲酸、山梨酸（仅酸形式）。
• ​​检出限与定量限​​：

  有机酸	检出限（%）	定量限（%）
  柠檬酸等常规酸	0.02	0.06
  富马酸	0.0001	0.0003
  苯甲酸、山梨酸	0.001	0.003

​​3. 方法原理​​

• ​​提取方式​​：
  • ​​常规酸（柠檬酸、酒石酸等）​​：硫酸溶液（30 mmol/L）超声提取。
    • 乳酸特殊处理：需用氢氧化钠皂化后调节pH至1.8~2.0。
  • ​​苯甲酸、山梨酸​​：甲醇提取后磷酸盐缓冲液稀释。
• ​​检测仪器​​：高效液相色谱仪（HPLC）配紫外/二极管阵列检测器。
• ​​定量方法​​：外标法，通过标准曲线计算含量。

​​4. 试剂与仪器​​

• ​​关键试剂​​：
  • 硫酸溶液（30 mmol/L）、甲醇、磷酸盐缓冲液（pH 2.5）。
  • 有机酸标准品（纯度≥99%，富马酸≥99%，乳酸≥88%）。
• ​​仪器设备​​：
  • HPLC（配离子排斥色谱柱或C18柱）、超声波清洗器、pH计/精密试纸、0.45 μm滤膜（水/有机系）。

​​5. 样品处理​​

• ​​取样与保存​​：取200 g代表性样品，密封保存，尽快分析。
• ​​提取步骤​​：
  • ​​常规酸​​：
    • 粉末/颗粒/液体型：硫酸溶液超声提取，定容后过滤。
    • 脂肪酸酯包被型：80℃超声提取。
  • ​​苯甲酸、山梨酸​​：甲醇超声提取，磷酸盐缓冲液稀释后过滤。

​​6. 色谱条件​​

• ​​常规酸（离子排斥色谱法）​​：
  • 色谱柱：Bio-Rad Aminex HPX-87H（300 mm×7.8 mm，9 μm）。
  • 流动相：30 mmol/L硫酸溶液，流速0.6 mL/min，检测波长210 nm，柱温32℃。
• ​​苯甲酸、山梨酸（反相色谱法）​​：
  • 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。
  • 流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液（10:90），流速1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温30℃。

​​7. 数据处理与精密度​​

• ​​计算公式​​：
  • 多点校准：w_i = /frac{/rho_i /times V /times n}{m /times 10^6} /times 100
  • 单点校准：w_i = /frac{A_i /times /rho_{si} /times V /times n}{A_{si} /times m /times 10^6} /times 100
• ​​精密度​​：两次独立测定结果的绝对差值≤算术平均值的5%。

​​8. 附录信息​​

• ​​附录A​​：11种有机酸标准品的CAS号、纯度要求（如柠檬酸CAS 5949-29-1，纯度≥99%）。
• ​​附录B​​：
  • ​​B.1​​：常规酸标准溶液色谱图（柠檬酸、酒石酸等保留时间示例）。
  • ​​B.2​​：富马酸色谱图（高灵敏度检测）。
  • ​​B.3​​：苯甲酸、山梨酸色谱图（反相色谱分离）。

​​9. 注意事项​​

• 富马酸需单独配制标准曲线（因苹果酸标准品可能含富马酸杂质）。
• 乳酸提取需强碱皂化以避免丙交酯干扰。
• 标准溶液需临用现配，避免降解。

​​总结​​：该标准详细规定了混合型饲料添加剂中有机酸的HPLC检测方法，涵盖提取、分离、定量全流程，适用于生产质量控制及监管检测，具有高灵敏度和精密度。