NY/T 4683-2025 饲料中黄霉素A的测定 液相色谱-串联质谱法

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4683-2025 主要内容总结

​​1. 适用范围​​

• ​​检测对象​​：配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中的黄霉素A（Moenomycin A）。
• ​​灵敏度​​：检出限0.1 mg/kg，定量限0.25 mg/kg。

​​2. 方法原理​​

• ​​提取​​：使用含0.1%甲酸的甲醇溶液提取饲料中的黄霉素A。
• ​​净化​​：通过亲水亲脂平衡性固相萃取柱（HLB，3 mL/60 mg）净化提取液。
• ​​检测​​：采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析，外标法定量，基质匹配标准曲线校准。

​​3. 试剂与材料​​

• ​​关键试剂​​：色谱纯甲醇、乙腈、甲酸，乙酸铵溶液（20 mmol/L，pH=5.0）。
• ​​标准品​​：黄霉素A标准储备液（1 mg/mL，-18℃保存6个月），中间液（10 μg/mL，-18℃保存1个月）。
• ​​耗材​​：0.22 μm有机系滤膜，HLB固相萃取柱。

​​4. 仪器设备​​

• ​​核心设备​​：配备电喷雾离子源（ESI）的LC-MS/MS仪。
• ​​辅助设备​​：分析天平（0.01 g/0.01 mg）、涡旋振荡器、超声波清洗机、高速离心机（≥10,000 r/min）、氮吹仪、pH计（精度0.01）。

​​5. 样品制备​​

• ​​处理要求​​：按GB/T 20195制备，粉碎过0.425 mm筛，混匀后密封保存。
• ​​空白样品​​：选择无黄霉素A残留的同类型饲料作为空白基质。

​​6. 试验步骤​​

​​6.1 提取与净化​​

• 称取5 g样品，加入25 mL 0.1%甲酸甲醇溶液，涡旋振荡5 min，超声5 min，离心后合并两次提取液，定容至50 mL。
• 取2 mL提取液过HLB柱，收集滤液，经0.22 μm滤膜过滤后进样。

​​6.2 基质匹配标准溶液制备​​

• 用空白基质溶液稀释标准中间液，配制浓度梯度为10.0~1000.0 ng/mL的标准系列溶液。

​​6.3 液相色谱条件​​

• ​​色谱柱​​：C18柱（100 mm×2.1 mm，3.0 μm）。
• ​​流动相​​：A相为20 mmol/L乙酸铵（pH=5.0），B相为乙腈，梯度洗脱（0~7 min内B相从10%升至95%后复位）。
• ​​流速​​：0.4 mL/min；柱温35℃；进样量10 μL。

​​6.4 质谱条件​​

• ​​电离模式​​：电喷雾负离子（ESI-）。
• ​​监测离子对​​：789.9→553.9（定性），789.9→575.9（定量）。
• ​​参数​​：锥孔电压25 V，碰撞能量30 eV（定量离子）和25 eV（定性离子）；源温度150℃，脱溶剂气流量1000 L/h。

​​7. 定性与定量​​

• ​​定性​​：保留时间偏差≤±2.5%，离子丰度比符合表3偏差范围（如＞50%时允许±20%）。
• ​​定量​​：标准曲线法（相关系数≥0.99）或单点校准（浓度偏差≤30%）。
• ​​计算公式​​：
  • ​​多点校准​​：w = /frac{/rho /times V}{m /times 1000}
  • ​​单点校准​​：w = /frac{A /times /rho_s /times V}{A_s /times m /times 1000}

​​8. 精密度要求​​

• 重复性条件下，两次测定结果的绝对差值≤算术平均值的20%。

​​9. 关键附录​​

• ​​附录A​​：提供黄霉素A基质匹配标准溶液（100 ng/mL）的定量离子色谱图，辅助结果比对。

​​10. 注意事项​​

• ​​专利声明​​：标准可能涉及专利，发布机构不承担识别责任。
• ​​样品保存​​：提取液需低温保存，标准溶液避免反复冻融。
• ​​仪器维护​​：定期校准质谱参数，确保色谱柱性能稳定。

​​总结​​：该方法通过优化提取净化步骤与LC-MS/MS参数，实现对饲料中黄霉素A的高灵敏度检测，适用于多种饲料基质，操作流程规范，数据质量控制严格。