NY/T 4678-2025 饲料中安普霉素的测定
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- 标准类型：农牧渔类
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-05-23
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资料介绍
中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4678-2025《饲料中安普霉素的测定》主要内容总结
一、标准修订背景
- 替代文件：代替农业部1486号公告-3-2010，首次修订。
- 主要修订内容：
- 调整适用范围、检出限和定量限。
- 新增仲裁法“液相色谱-串联质谱法”（LC-MS/MS）。
- 优化试样提取方法（如提取液体积和净化步骤）。
二、适用范围
- 适用对象：配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料。
- 检测方法及灵敏度：
- LC-MS/MS法（仲裁法）：检出限0.04 mg/kg，定量限0.10 mg/kg。
- HPLC法：检出限2 mg/kg，定量限5 mg/kg。
三、规范性引用文件
- GB/T 1.1-2020：标准化文件起草规则。
- GB/T 6682：分析实验室用水标准。
- GB/T 20195：动物饲料试样制备规范。
四、检测方法详述
方法一：液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS，仲裁法）
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原理：
- 盐酸溶液提取，混合型强阳离子固相萃取柱净化，内标法定量（安普霉素-D7为内标）。
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试剂与材料：
- 关键试剂：甲醇、乙腈、甲酸、异丙醇、0.1 mol/L盐酸溶液、5%氨水甲醇溶液等。
- 标准品：硫酸安普霉素（纯度≥96%）、醋酸安普霉素-D7（内标）。
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仪器设备：
- LC-MS/MS仪（电喷雾离子源）、离心机（≥7000 r/min）、涡旋混合器、固相萃取装置等。
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样品制备：
- 粉碎过0.425 mm筛，混匀后保存。
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试验步骤：
- 提取：2 g样品加20 mL盐酸溶液超声提取，离心取上清。
- 净化：固相萃取柱活化后过样，淋洗后氨水甲醇洗脱，氮吹复溶。
- 色谱条件：
- 色谱柱：酰胺柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）。
- 流动相：梯度洗脱（A相：乙腈-甲酸-乙酸铵；B相：水-甲酸-乙酸铵）。
- 流速0.3 mL/min，柱温35℃。
- 质谱条件：
- 正离子模式（ESI⁺），多反应监测（MRM），定量离子对540.1→378.0（安普霉素）、547.3→381.1（内标）。
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数据处理：
- 内标法定量，标准曲线线性范围20~1000 ng/mL，相关系数≥0.99。
- 计算公式考虑稀释倍数、提取液体积等参数。
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精密度：两次测定结果绝对差值≤15%。
方法二：高效液相色谱法（HPLC）
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原理：
- 盐酸提取，固相萃取净化，邻苯二甲醛衍生化后荧光检测，外标法定量。
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试剂与材料：
- 关键试剂：硼酸盐缓冲溶液（pH 9.5）、衍生试剂（邻苯二甲醛+2-巯基乙醇）、乙酸-乙酸铵流动相等。
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仪器设备：
- HPLC仪（荧光检测器，激发波长230 nm，发射波长389 nm）。
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试验步骤：
- 提取与净化：同LC-MS/MS法，复溶后用硼酸盐缓冲液溶解。
- 衍生化：试样溶液与衍生试剂反应5分钟。
- 色谱条件：
- 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。
- 流动相：乙酸-乙酸铵溶液（A相）与乙腈（B相）梯度洗脱。
- 流速1.0 mL/min，柱温30℃。
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数据处理：
- 外标法定量，标准曲线线性范围0.5~10 μg/mL，相关系数≥0.99。
- 计算公式考虑稀释倍数及净化步骤体积。
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精密度：同LC-MS/MS法。
五、附录
- 附录A：LC-MS/MS法安普霉素标准溶液（20 ng/mL）的定量离子对色谱图。
- 附录B：HPLC法安普霉素标准溶液（10 μg/mL）色谱图，保留时间约5.5分钟。
六、其他说明
- 注意事项：
- 避免使用玻璃容器接触标准溶液及样品溶液。
- 标准溶液需冷藏保存，临用现配。
- 专利声明：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
- 起草单位：西南民族大学、四川特驱农牧科技集团等。
七、关键修订对比（与旧版）
| 修订项 | 旧版（2010） | 新版（2025） |
|---|---|---|
| 检测方法 | 仅HPLC法 | 新增LC-MS/MS法（仲裁法）+优化HPLC法 |
| 检出限/定量限 | HPLC法未明确 | LC-MS/MS法：0.04/0.10 mg/kg；HPLC法：2/5 mg/kg |
| 提取方法 | 未详细描述 | 明确盐酸溶液体积、超声时间及离心参数 |
| 适用范围 | 未明确饲料类型 | 扩展至复合预混合饲料 |
此标准通过引入高灵敏度的LC-MS/MS法作为仲裁方法，提升了检测的准确性和适用范围，同时优化了传统HPLC法的操作流程，满足不同检测需求。