GB 31659.11-2025 食品安全国家标准 禽蛋中头孢噻呋代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1　范围

　　本文件规定了禽蛋中头孢噻呋代谢物去呋喃甲酰基头孢噻呋残留量检测的制样和液相色谱串联质

　　谱测定方法.

　　本文件适用于鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋中去呋喃甲酰基头孢噻呋残留量的测定,其他禽蛋的检测可参照执行.

　　2　规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅

　　该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.

　　GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法

　　3　术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义.

　　4　原理

　　试样中残留的头孢噻呋及代谢物,加入0?4%二硫赤藓醇溶液混匀,用14%碘乙酰胺溶液衍生化,生

　　成稳定的乙酰胺衍生物,水饱和正己烷除脂,固相萃取柱净化浓缩,液相色谱串联质谱测定,内标法定量.

　　5　试剂与材料

　　除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水.

　　5?1　试剂

　　5?1?1　乙腈(CH3CN):色谱纯.

　　5?1?2　甲酸(HCOOH):色谱纯.

　　5?1?3　甲醇(CH3OH):色谱纯.

　　5?1?4　二硫赤藓醇(C4H10O2S2).

　　5?1?5　碘乙酰胺(C2H4INO).

　　5?1?6　硼酸(H3BO3).

　　5?1?7　氯化钾(KCl).

　　5?1?8　磷酸二氢钾(KH2PO4).

　　5?1?9　正己烷(C6H14).

　　5?1?10　氢氧化钾(KOH).

　　5?2　溶液配制

　　5?2?1　50%乙腈水溶液:取乙腈50mL,用水稀释至100mL.

　　5?2?2　90%乙腈水溶液:取乙腈90mL,用水稀释至100mL.

　　5?2?3　0?1%甲酸乙腈溶液:取甲酸1mL,用乙腈稀释至1000mL.

　　5?2?4　0?1%甲酸水溶液:取甲酸1mL,用水稀释至1000mL.

　　5?2?5　45%氢氧化钾:称取45g氢氧化钾,加水溶解并稀释至100mL.

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　　GB31659?11—2025

　　5?2?6　0?05mol/L硼酸缓冲液:称取19g硼酸和3?7g氯化钾,加水溶解并稀释至1000mL,用45%氢

　　氧化钾调pH 至9±0?05.

　　5?2?7　0?025mol/L磷酸缓冲液:称取3?4g磷酸二氢钾,加水溶解并稀释至1000mL,用45%氢氧化钾

　　调pH 至7±0?05.

　　5?2?8　0?4%二硫赤藓醇溶液:称取1g二硫赤藓醇溶于250mL硼酸缓冲液(0?05mol/L)中,临用现配.

　　5?2?9　14%碘乙酰胺溶液:称取7g碘乙酰胺溶于50mL磷酸缓冲液(0?025mol/L)中,临用现配.

　　5?2?10　水饱和正己烷:取水100mL,加正己烷100mL,摇匀,静置分层,取上层液.

　　5?3　标准品

　　5?3?1　去呋喃甲酰基头孢噻呋(Desfuroylceftiofur,C14H15N5O5S3,CAS号:120882G22G6),含量≥95%.

　　5?3?2　去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3(DesfuroylceftiofurGD3,C14H12D3N5O5S3,CAS号:120882G22G6GunlaG

　　belled),含量≥95%.

　　5?4　标准溶液制备

　　5?4?1　标准储备液:取去呋喃甲酰基头孢噻呋、去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标准品各适量(相当于有效成分

　　约10mg),精密称定,分别用50%乙腈水溶解并稀释定容于100mL容量瓶中,配制成浓度为100μg/mL的

　　去呋喃甲酰基头孢噻呋、去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标准储备液,2℃~8℃保存,有效期1个月.

　　5?4?2　标准工作液:分别精密量取100μg/mL的去呋喃甲酰基头孢噻呋、去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标

　　准储备液各0?1mL,于100mL容量瓶中,用50%乙腈水稀释至刻度,配制成浓度为100μg/L的去呋喃

　　甲酰基头孢噻呋、去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标准工作液,临用现配.

　　5?5　材料

　　5?5?1　固相萃取柱:反相混合型亲水亲脂平衡共聚物固相萃取柱,200mg/6mL,或相当者.

　　5?5?2　微孔尼龙滤膜:0?22μm.

　　6　仪器和设备

　　6?1　液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源.

　　6?2　分析天平:感量分别为0?00001g和0?01g.

　　6?3　涡旋混合器.

　　6?4　冷冻离心机:转速10000r/min.

　　6?5　氮吹仪.

　　6?6　固相萃取装置.

　　7　试样的制备与保存

　　7?1　试样的制备

　　取适量新鲜或冷藏的空白或供试禽蛋,去壳后混合均匀.

　　a)　取均质的供试样品,作为供试试样;

　　b)　取均质的空白样品,作为空白试样;

　　c)　取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.

　　7?2　试样的保存

　　-18℃以下保存.

　　8　测定步骤

　　8?1　提取

　　称取禽蛋试料(2±0?05)g,置于50mL塑料离心管,添加去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标准工作液

　　100μL,加0?4%二硫赤藓醇溶液10mL,涡旋混匀2min,室温静置15min.加入14%碘乙酰胺溶液

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　　GB31659?11—2025

　　3mL,涡旋混匀2min,室温衍生15min.衍生完毕后,加水饱和正己烷10mL,充分混匀,4℃10000r/min

　　离心20min,取下层清液加入水饱和正己烷10mL重复萃取1次,下层清液备用.

　　8?2　净化

　　用6mL甲醇、6mL水活化固相萃取柱,将全部下层清液过柱,用6mL水淋洗,抽干,用5mL90%

　　乙腈水溶液洗脱,收集全部洗脱液.50℃水浴氮吹至近干,用0?1%甲酸水溶液1?0mL溶解残余物,涡

　　旋混匀,过0?22μm 微孔滤膜,供液相色谱串联质谱测定.

　　8?3　标准曲线的制备

　　精密量取去呋喃甲酰基头孢噻呋和去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 标准储备液适量,分别置于50mL塑

　　料离心管中,加0?4%二硫赤藓醇溶液10mL,涡旋混匀2min,室温静置15min.加入14%碘乙酰胺溶

　　液3mL,涡旋混匀2min,室温衍生15min.衍生完毕后,加0?1%甲酸水溶液定容至20mL混匀.用

　　0?1%甲酸水溶液稀释配制成去呋喃甲酰基头孢噻呋浓度为2μg/L、4μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、

　　100μg/L,内标浓度为10μg/L的系列标准工作溶液,临用现配,供液相色谱串联质谱测定.以测试药物

　　和其对应内标的特征离子峰面积之比为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线,求回归方程和相关

　　系数.

　　8?4　测定

　　8?4?1　液相色谱参考条件

　　a)　色谱柱:C18(150mm×2?1mm,粒径1?8μm),或相当者;

　　b) 柱温:30℃;

　　c) 进样量:10μL;

　　d) 流速:0?3mL/min;

　　e) 流动相:A 为0?1%甲酸乙腈溶液,B为0?1%甲酸水溶液,梯度洗脱程序见表1.

　　表1　梯度洗脱程序

　　时间

　　min

　　A

　　%

　　B

　　%

　　0?0 5 95

　　5 80 20

　　8 80 20

　　8?1 5 95

　　10 5 95

　　8?4?2　质谱参考条件

　　a)　离子源:电喷雾(ESI)离子源;

　　b) 扫描方式:正离子扫描;

　　c) 检测方式:多反应监测;

　　d) 喷雾电压:5500V;

　　e) 离子源温度:550℃;

　　f) 雾化气压力(Gas1):379kPa;

　　g) 辅助加热气压力(Gas2):234kPa;

　　h) 气帘气压力(Curtaingas):241kPa;

　　i) 待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值见表2.

　　表2　待测药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参考值

　　被测物名称

　　定性离子对

　　m/z

　　定量离子对

　　m/z

　　去簇电压

　　V

　　碰撞能量

　　eV

　　去呋喃甲酰基头孢噻呋487?0>241?0

　　487?0>125?9 487?0>241?0 50 27

　　74

　　3

　　GB31659?11—2025

　　表2 (续)

　　被测物名称

　　定性离子对

　　m/z

　　定量离子对

　　m/z

　　去簇电压

　　V

　　碰撞能量

　　eV

　　去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 490?0>244?0 490?0>244?0 50 27

　　8?4?3　测定法

　　8?4?3?1　定性测定

　　在相同测试条件下,试料溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋与其内标去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 的保

　　留时间之比与标准溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋与其内标去呋喃甲酰基头孢噻呋GD3 的保留时间之比偏

　　差在1%以内;且检测到的相对离子丰度应与浓度相当的校正标准溶液相对离子丰度一致,其允许偏差为

　　±40%.

　　8?4?3?2　定量测定

　　取试料溶液和标准溶液,做单点或多点校准,按内标法定量.标准溶液及试料溶液中目标物的响应

　　值均应在仪器检测的线性范围内.在上述液相色谱串联质谱条件下,标准溶液特征离子质量色谱图见

　　附录A.

　　8?5　空白试验

　　取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.

　　9　结果计算和表述

　　试样中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物的残留量按标准曲线或公式(1)计算.

　　X =

　　Ai ×A′is×Cs×Cis×V

　　Ais×As×C′is×m ????????????? (1)

　　式中:

　　X ———试样中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);

　　Ai ———试料溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物的峰面积;

　　A′is———标准溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物内标的峰面积;

　　Cs ———标准溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　Cis ———试料溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　V ———溶解残余物所用试料溶液体积的数值,单位为毫升(mL);

　　Ais ———试料溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物内标的峰面积;

　　As ———标准溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物的峰面积;

　　C′is———标准溶液中去呋喃甲酰基头孢噻呋药物内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　m ———供试试料质量的数值,单位为克(g);

　　10　方法灵敏度、正确度和精密度

　　10?1　灵敏度

　　本方法去呋喃甲酰基头孢噻呋的检出限为1μg/kg,定量限为2μg/kg.

　　10?2　正确度

　　本方法去呋喃甲酰基头孢噻呋在2μg/kg~20μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~120%.

　　10?3　精密度

　　本方法批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%.

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　　GB31659?11—2025

　　附　录　A

　　(资料性)

　　标准溶液特征离子质量色谱图

　　去呋喃甲酰基头孢噻呋标准溶液特征离子质量色谱图见图A?1.

　　图A?1　去呋喃甲酰基头孢噻呋标准溶液特征离子质量色谱图(4μg/L)