GB 31659.13-2025 食品安全国家标准 禽蛋中阿维菌素类药物残留量的测定 高效液相色谱法

　　1　范围

　　本文件规定了禽蛋中阿维菌素类药物残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法.

　　本文件适用于禽蛋中阿维菌素B1a、22,23G二氢阿维菌素B1a、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素B1a和莫

　　昔克丁残留量的测定.

　　2　规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅

　　该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.

　　GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法

　　3　术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义.

　　4　原理

　　试样中残留的阿维菌素类药物经酸化乙腈提取,固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱法测定,外标法

　　定量.

　　5　试剂和材料

　　水为符合GB/T6682规定的一级水.

　　5?1　试剂

　　5?1?1　乙腈(CH3CN):色谱纯.

　　5?1?2　甲酸(HCOOH):色谱纯.

　　5?1?3　乙酸铵(CH3COONH4):色谱纯.

　　5?2　溶液配制

　　5?2?1　1%甲酸乙腈溶液:取甲酸10mL,用乙腈稀释至1000mL,混匀.

　　5?2?2　0?1%甲酸乙腈溶液:取甲酸1mL,用乙腈稀释至1000mL,混匀.

　　5?2?3　含10mmol/L乙酸铵的0?1%甲酸水溶液:取乙酸铵0?77g,用适量水充分溶解,加入甲酸1mL

　　后,加水稀释至1000mL,混匀,现用现配.

　　5?2?4　50%乙腈水溶液:取乙腈500mL,加水稀释至1000mL,混匀.

　　5?3　标准品

　　阿维菌素B1a、22,23G二氢阿维菌素B1a、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素B1a和莫昔克丁,含量均≥

　　95%,见附录A.

　　5?4　标准溶液制备

　　5?4?1　标准储备液:取阿维菌素B1a、22,23G二氢阿维菌素B1a、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素B1a、莫昔

　　克丁标准品适量(相当于各有效成分10mg),精密称定,用乙腈溶解并稀释定容于100mL容量瓶,配制

　　成浓度为100μg/mL标准储备液,-18℃以下避光保存,有效期3个月.

　　5?4?2　10μg/mL混合标准工作液:分别精密量取阿维菌素类药物的标准储备液各1mL,于10mL容量瓶

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　　GB31659?13—2025

　　中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液.2℃~8℃避光保存,有效期1个月.

　　5?4?3　1μg/mL混合标准工作液:精密量取10μg/mL混合标准工作液1mL,于10mL容量瓶中,用乙

　　腈稀释至刻度,配制成浓度为1μg/mL的混合标准工作液,现用现配.

　　5?5　材料

　　5?5?1　通过型亲水亲脂平衡固相萃取小柱:150mg/3mL,或相当者.

　　5?5?2　微孔尼龙滤膜:0?22μm.

　　5?5?3　盐析包:含4g氯化钠和1g无水硫酸镁.

　　6　仪器和设备

　　6?1　液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源.

　　6?2　分析天平:感量0?00001g和0?01g.

　　6?3　离心机:转速不低于4000r/min.

　　6?4　组织匀浆机.

　　6?5　涡旋混合器.

　　6?6　振荡器.

　　6?7　氮吹仪.

　　6?8　固相萃取装置.

　　7　试样的制备与保存

　　7?1　试样的制备

　　取适量新鲜或解冻的空白或供试禽蛋样品,洗净去壳,并均质.

　　a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;

　　b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;

　　c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.

　　7?2　试样的保存

　　-18℃以下保存.

　　8　测定步骤

　　8?1　提取

　　称取试料(5±0?05)g于50mL离心管中,加入纯水5mL并涡旋混合30s后,准确加入1%甲酸乙

　　腈溶液10mL,振荡15min.加入含4g氯化钠和1g无水硫酸镁的盐析包,涡旋1min,4000r/min离心

　　10min,取上层乙腈相,备用.

　　8?2　净化

　　取备用液2mL至固相萃取小柱,流速控制在1mL/min~2mL/min,收集流出液,并用1mL乙腈淋

　　洗固相萃取小柱,合并流出液和淋洗液,40 ℃下氮气吹干.用50%乙腈水溶液1mL溶解残留物,超声

　　1min,过0?22μm 微孔尼龙滤膜,供液相色谱串联质谱仪测定.

　　8?3　基质匹配标准曲线的制备

　　精密量取标准工作溶液适量,用经提取和净化的空白试料溶液稀释配制浓度为1μg/L、5μg/L、

　　10μg/L、50μg/L、100μg/L和250μg/L的基质匹配标准溶液,过滤后供液相色谱串联质谱测定.以各药

　　物定量离子色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系

　　数.

　　8?4　测定

　　8?4?1　液相色谱参考条件

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　　GB31659?13—2025

　　a)　色谱柱:C18色谱柱(100mm×2?1mm,1?7μm),或相当者;

　　b) 流动相:A 为0?1%甲酸乙腈溶液,B为含10mmol/L乙酸铵的0?1%甲酸水溶液,梯度洗脱程

　　序见表1;

　　c) 流速:0?4mL/min;

　　d) 柱温:40℃;

　　e) 进样量:5μL.

　　表1　梯度洗脱程序

　　时间

　　min

　　A

　　%

　　B

　　%

　　0 50 50

　　1?0 50 50

　　4?0 90 10

　　8?0 90 10

　　8?5 50 50

　　10?0 50 50

　　8?4?2　质谱参考条件

　　a)　离子源:电喷雾离子源;

　　b) 扫描方式:正离子扫描;

　　c) 检测方式:多反应监测;

　　d) 喷雾电压:5?5kV;

　　e) 离子源温度:450℃;

　　f) 辅助气1:50psi;

　　g) 辅助气2:50psi;

　　h) 气帘气:30psi;

　　i) 定性离子对、定量离子对、碰撞能量和去簇电压见表2.

　　表2　阿维菌素类药物的质谱参考参数

　　被测物名称

　　定性离子对

　　m/z

　　定量离子对

　　m/z

　　去簇电压

　　V

　　碰撞能量

　　eV

　　阿维菌素B1a 890?5>567?4

　　890?5>305?1 890?5>567?4 120 20

　　120 32

　　22,23G二氢阿维菌素B1a 892?6>569?5

　　892?6>307?2 892?6>569?5 120 21

　　120 33

　　多拉菌素916?7>593?2

　　916?7>331?4 916?7>331?4 120 20

　　120 32

　　乙酰氨基阿维菌素B1a 914?5>186?1

　　914?5>330?0 914?5>186?1 160 23

　　160 20

　　莫昔克丁640?4>528?3

　　640?4>498?1 640?4>528?3 120 13

　　120 17

　　8?4?3　测定法

　　8?4?3?1　定性测定

　　在相同测试条件下,试样溶液中阿维菌素类药物与校正标准溶液中阿维菌素类药物的保留时间偏差

　　在±0?1min以内;且检测到的相对离子丰度应与浓度相当的校正标准溶液相对离子丰度一致,其允许偏

　　差为±40%.

　　8?4?3?2　定量测定

　　取试样溶液和基质匹配标准工作液,做单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量,基质匹配标准

　　工作液及试样溶液中的阿维菌素类药物响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱质谱条件下,

　　3

　　GB31659?13—2025

　　阿维菌素类药物基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见附录B.

　　8?5　空白试验

　　取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.

　　9　结果计算和表述

　　试样中阿维菌素类药物的残留量按标准曲线或公式(1)计算.

　　X =

　　Cs×A ×V1 ×V3

　　As×V2×m ??????????????? (1)

　　式中:

　　X ———试样中阿维菌素类药物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);

　　Cs ———基质匹配标准溶液中阿维菌素类药物浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);

　　A ———试料溶液中阿维菌素类药物的峰面积;

　　V1 ———试料提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);

　　V3 ———试样最终定容体积的数值,单位为毫升(mL);

　　As———基质匹配标准溶液中阿维菌素类药物的峰面积;

　　V2 ———净化用提取液体积的数值,单位为毫升(mL);

　　m ———试料质量的数值,单位为克(g).

　　10　检测方法灵敏度、正确度和精密度

　　10?1　灵敏度

　　本方法的检出限为0?2μg/kg;莫昔克丁定量限为1μg/kg,阿维菌素B1a、22,23G二氢阿维菌素B1a、

　　多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素B1a定量限为0?5μg/kg.

　　10?2　正确度

　　本方法在0?5μg/kg~200μg/kg添加浓度水平上的回收率为60%~120%.

　　10?3　精密度

　　本方法的批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%.

　　4

　　GB31659?13—2025

　　附　录　A

　　(资料性)

　　阿维菌素类药物的中英文名称、CAS号、化学分子式及相对分子质量

　　阿维菌素类药物的中英文名称、CAS号、化学分子式及相对分子质量见表A?1.

　　表A?1　阿维菌素类药物的中英文名称、CAS号、化学分子式及相对分子质量

　　中文名称英文名称CAS号化学分子式相对分子质量

　　阿维菌素B1a AbamectinB1a 65195G55G3 C48H72O14 872?49

　　22,23G二氢阿维菌素B1a 22,23GdihydroavermectinB1a 71827G03G7 C48H74O14 874?51

　　多拉霉素Doramectin 117704G25G3 C50H74O14 898?51

　　乙酰氨基阿维菌素B1a EprinomectinB1a 133305G88G1 C50H75NO14 913?52

　　莫昔克丁Moxidectin 113507G06G5 C37H53NO8 639?38

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　　GB31659?13—2025

　　附　录　B

　　(资料性)

　　阿维菌素类药物基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图

　　空白鸡蛋阿维菌素类药物基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见图B?1.

　　标引序号说明:

　　1———乙酰氨基阿维菌素B1a;

　　2———阿维菌素B1a;

　　3———多拉菌素;

　　4———莫昔克丁;

　　5———22,23G二氢阿维菌素B1a.

　　图B?1　空白鸡蛋阿维菌素类药物基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图(2ng/mL)