GB 31659.9-2025 食品安全国家标准 禽蛋中卡巴氧和喹乙醇代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1　范围

　　本文件规定了禽蛋中卡巴氧代谢物喹啉G2G羧酸(QCA)和喹乙醇代谢物3G甲基喹啉G2G羧酸(MQCA)残

　　留量检测的制样和液相色谱G串联质谱测定方法.

　　本文件适用于鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋中QCA 和MQCA 残留量的测定,其他禽蛋的检测可参照执行.

　　2　规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款,其中,注日期的引用文件,

　　仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

　　文件.

　　GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法

　　3　术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义.

　　4　原理

　　试样中残留的QCA 和MQCA 残留经偏磷酸溶液水解提取,叔丁基甲醚萃取后,用磷酸盐缓冲液反

　　萃取,混合型强阴离子交换柱净化,酸性甲醇洗脱,液相色谱串联质谱法测定,内标法定量.

　　5　试剂和材料

　　除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水.

　　5?1　试剂

　　5?1?1　甲醇(CH3OH):色谱纯.

　　5?1?2　乙腈(CH3CN):色谱纯.

　　5?1?3　甲酸(HCOOH):色谱纯.

　　5?1?4　偏磷酸(HPO3).

　　5?1?5　叔丁基甲醚((CH3)3COCH3).

　　5?1?6　十二水合磷酸氢二钠[Na2HPO4?12H2O].

　　5?1?7　氢氧化钠(NaOH).

　　5?2　溶液配制

　　5?2?1　10%偏磷酸G20%乙腈溶液:称取100g偏磷酸,放入1000mL烧杯中,加入600mL水,加热沸腾

　　至溶解,冷却至室温后,加入200mL乙腈,然后加水稀释至1000mL,混匀.

　　5?2?2　磷酸盐缓冲液:称取十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)3?58g,加入900mL水溶解,用磷

　　酸调节pH 至7?0,加水稀释至1000mL,混匀.

　　5?2?3　0?05mol/L氢氧化钠溶液:称取0?5g氢氧化钠,加水溶解,冷却至室温后,加水稀释至250mL,

　　混匀.

　　5?2?4　2%甲酸甲醇:取2mL甲酸,加甲醇稀释至100mL,混匀.

　　5?2?5　0?1%甲酸甲醇溶液:取10mL甲醇和100μL甲酸,加水稀释至100mL,混匀.

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　　GB31659?9—2025

　　5?2?6　0?1%甲酸水溶液:取1?0mL甲酸,加水稀释至1000mL,混匀.

　　5?3　标准品

　　5?3?1　喹啉G2G羧酸(quinoxalieG2Gcarboxylicacid,QCA,C9H5N2O2,CAS号:879G65G2)含量≥97?0%.

　　5?3?2　3G甲基喹啉G2G羧酸(methylG3GquinoxalineG2Gcarboxylicacid,MQCA,C10 H8N2O2,CAS 号:

　　74003G63G7)含量≥97?0%.

　　5?3?3　内标:氘代喹啉G2G羧酸(quinoxalieG2GcarboxylicacidGD4,QCAGD4,C9HD4N2O2)含量≥98?0%

　　5?3?4　内标:氘代3G甲基喹啉G2G羧酸(methylG3GquinoxalineG2GcarboxylicacidGD4,MQCAGD4,

　　C10H4D4N2O2)含量≥98?0%.

　　5?4　标准溶液的制备

　　5?4?1　标准储备液:取QCA 和MQCA 标准品适量(相当于各有效成分约10mg),精密称定,用甲醇溶解

　　并稀释定容于100mL棕色容量瓶,配制成浓度为100mg/L的QCA 和MQCA 标准储备液,-18℃以下

　　避光保存,有效期6个月.

　　5?4?2　内标储备液:取QCAGD4 和MQCAGD4 标准品适量(相当于各有效成分约10mg),精密称定,用甲

　　醇溶解并稀释定容于100mL棕色容量瓶,配制成浓度为100mg/L的QCAGD4 和MQCAGD4 内标储备

　　液,-18℃以下避光保存,有效期6个月.

　　5?4?3　混合标准工作液:分别精密移取QCA 和MQCA 标准储备液各0?2mL于100mL棕色容量瓶,

　　用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为200μg/L的混合标准工作液,4℃以下避光保存,有效期1个月.

　　5?4?4　混合内标工作液:分别精密移取QCAGD4 和MQCAGD4 内标储备液各0?2mL于100mL棕色容

　　量瓶,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为200μg/L的混合内标工作液,4℃以下避光保存,有效期1个月.

　　5?5　材料

　　5?5?1　混合型强阴离子交换柱:60mg/3mL,或相当者.

　　5?5?2　微孔滤膜:0?22μm,有机相.

　　6　仪器和设备

　　6?1　液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).

　　6?2　分析天平:感量0?00001g和0?01g

　　6?3　氮吹仪.

　　6?4　超声波清洗仪.

　　6?5　酸度计.

　　6?6　涡旋混合器.

　　6?7　高速离心机:不低于8000r/min.

　　6?8　组织匀浆机.

　　6?9　固相萃取装置.

　　7　试样的制备与保存

　　7?1　试样的制备

　　取适量新鲜或冷藏的空白或供试禽蛋,去壳并使均质.

　　a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;

　　b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;

　　c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.

　　7?2　试样的保存

　　-18℃以下保存.

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　　8　测定步骤

　　8?1　提取

　　称取试料(5±0?05)g,于50mL聚丙烯离心管,加50μL混合内标工作液和6mL10%偏磷酸G20%

　　乙腈溶液,涡旋1min混匀,超声10min,8000r/min离心5min.取上清液于另一50mL离心管中,残

　　渣中加6mL10%偏磷酸G20%乙腈溶液,重复提取1次,合并2次提取液.在提取液中加10mL叔丁基

　　甲醚,涡旋1min混匀,4500r/min离心5min,转移上层有机相至另一50mL离心管,用10mL叔丁基

　　甲醚重复提取1次,合并上层有机相.加入10mL磷酸盐缓冲液,涡旋2min,4500r/min离心5min,弃

　　去上层有机相,下层磷酸缓冲液备用.

　　8?2　净化

　　固相萃取柱依次用甲醇和水各3mL活化,取备用液过柱,依次用0?05mol/LNaOH 溶液和甲醇溶

　　液各3mL淋洗,用2%甲酸甲醇溶液6mL洗脱.收集洗脱液,40 ℃水浴氮气吹干,残余物中加0?1%

　　甲酸甲醇溶液1?0mL涡旋1min,过0?22μm 滤膜,供液相色谱串联质谱仪测定.

　　8?3　标准曲线的制备

　　精密量取适量混合标准工作液及混合内标标准工作液,用初始流动相稀释配制成浓度为1ng/mL、

　　2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的系列标准溶液(内标均为10ng/mL),供液相色

　　谱串联质谱仪测定.以测得的待测物与对应内标的特征离子峰面积之比为纵坐标、标准溶液浓度为横

　　坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.

　　8?4　测定

　　8?4?1　液相色谱参考条件

　　a)　色谱柱:C18色谱柱(100mm×2?1mm,1?8μm),或性能相当者;

　　b)　流动相:A 为0?1%甲酸水溶液,B为甲醇,梯度洗脱程序见表1;

　　c)　流速:0?4mL/min;

　　d)　柱温:30℃;

　　e)　进样量:5?0μL.

　　表1　梯度洗脱程序

　　时间

　　min

　　A

　　%

　　B

　　%

　　0?00 90 10

　　4?00 30 70

　　4?10 0 100

　　5?00 0 100

　　5?10 90 10

　　6?00 90 10

　　8?4?2　质谱参考条件

　　a)　离子源:电喷雾离子源;

　　b)　扫描方式:正离子扫描;

　　c)　检测方式:多反应监测;

　　d)　毛细管电压:3000V;

　　e)　离子源温度:150℃;

　　f)　脱溶剂流速:15L/min;

　　g)　鞘气温度:300℃;

　　h)　鞘气流速:12L/min;

　　i) 待测物定性离子对、定量离子对和碰撞能量和碎片电压见表2.

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　　GB31659?9—2025

　　表2　定性离子对、定量离子对、碰撞能量和碎片电压

　　化合物名称

　　定性离子对(碰撞能量)

　　m/z(eV)

　　定量离子对(碰撞能量)

　　m/z(eV)

　　碎片电压

　　V

　　QCA 175>129(18)

　　175>101?9(35) 175>129(18) 380

　　MQCA 189?1>145?1(10)

　　189?1>143?1(15) 189?1>145?1(10) 380

　　QCAGD4 179>133(20)

　　179>106(35) 179>106(35) 380

　　MQCAGD4 192?9>149(12)

　　192?9>146?9(15) 192?9>149(12) 380

　　8?4?3　定性测定

　　在相同测试条件下,试料溶液中QCA 和MQCA 与其内标QCAGD4 和MQCAGD4 的保留时间之比与

　　标准溶液中QCA 和MQCA 与其内标QCAGD4 和MQCAGD4 的保留时间之比偏差在1%以内;且检测到

　　的相对离子丰度应与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致,其允许偏差为±40%.

　　8?4?4　定量测定

　　取试料溶液和相应的标准溶液,做单点或多点校准,按内标法定量,试料溶液及标准溶液中目标物的

　　响应值均应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱质谱条件下,标准溶液特征离子质量色谱图见附录

　　A.

　　8?5　空白试验

　　取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.

　　9　结果计算和表述

　　试样中待测物的残留量按标准曲线或公式(1)计算.

　　X =

　　Ai ×A′is×Cs×Cis×V

　　Ais×As×C′is×m ????????????? (1)

　　式中:

　　X ———供试试样中待测物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);

　　Ai ———供试试料溶液中待测物的峰面积;

　　A′is———标准溶液中同位素内标的峰面积;

　　Cs ———标准溶液中待测物浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　Cis ———供试试料溶液中同位素内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　V ———供试试样最终定容体积的数值,单位为毫升(mL);

　　Ais ———供试试料溶液中同位内标的峰面积;

　　As ———标准溶液中待测物的峰面积;

　　C′is———标准溶液中同位素内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);

　　m ———供试试样质量的数值,单位为克(g).

　　10　检测方法的灵敏度、正确度和精密度

　　10?1　灵敏度

　　本方法中QCA 和MQCA 的检出限均为0?2μg/kg,定量限均为0?5μg/kg.

　　10?2　正确度

　　本方法中QCA 和MQCA 在0?5μg/kg~10?0μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~120%.

　　10?3　精密度

　　本方法批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%.

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　　附　录　A

　　(资料性)

　　标准溶液特征离子质量色谱图

　　标准溶液特征离子质量色谱图见图A?1.

　　注:QCA和MQCA浓度均为10μg/L,QCAGD4 和MQCAGD4 浓度均为10μg/L.

　　图A?1　标准溶液特征离子质量色谱图

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