DB4413/T 64-2025 橙黄玉凤花组织培养育苗技术规程

　　ICS 65.020.20 CCS B 61

　　惠州市地方标准

　　DB 4413/T 64—2025

　　橙黄玉凤花组织培养育苗技术规程

　　Code of practice on tissue culture of Habenaria rhodocheila

　　2025 - 05 - 31 发布

　　2025 - 08 - 31 实施

　　惠州市市场监督管理局  发 布

　　DB 4413/T 64—2025

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。

　　本文件由惠州市林业局提出并归口。 本文件起草单位：惠州市林业科学研究所(惠州植物园管理服务中心)、惠州市林学会。 本文件主要起草人：刘德浩、钟小华、何沁园、吴颖、郑洲翔、黄丽纯、陈智涛、孟蕊、舒夏竺、 巫添辉、江惠兰、卢永辉、李运龙、王少东、周小峰、刘健、张展鹏。

　　I

　　DB 4413/T 64—2025

　　橙黄玉凤花组织培养育苗技术规程

　　1 范围

　　本文件规定了橙黄玉凤花(Habenaria rhodocheila)组织培养育苗过程中外植体采集、外植体处理、 瓶苗培育、瓶苗移植、病虫害防治、档案管理等技术要求。

　　本文件适用于橙黄玉凤花组培苗培育。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。

　　GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 LY/T 2752 林木轻基质无纺布容器育苗技术规程

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。 3.1

　　橙黄玉凤花 Habenaria rhodocheila

　　橙黄玉凤花(Habenaria rhodocheila)是兰科玉凤花属多年生草本植物，块茎长圆形，茎具叶;叶线 状披针形或近长圆形，花茎无毛;花苞片卵状披针形，萼片和花瓣绿色，唇瓣红、橙红或橙黄色，花瓣 直立，匙状线形;蒴果纺锤形，有喙;花期7月～8月，果期10月～11月。

　　4 外植体

　　4.1 采集 需在连续 3 d 晴天后采集成熟且未开裂的蒴果。

　　4.2 消毒处理 用细毛刷清洁蒴果表面杂质，在超净工作台上用75%乙醇表面消毒20 s～30 s ，无菌水冲洗1次～2

　　次;然后用添加1滴～2滴吐温80的0.1%HgCl2溶液浸泡并不断摇动12 min，用无菌水冲洗4次～6次，用 灭菌过的滤纸吸干表面水分备用。

　　5 瓶苗培育

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　　5.1 培养基 5.1.1 配制

　　种子萌发培养基为1/2MS+NAA0.5 mg/L+AC0.2%，增殖培养基为1/2MS+NAA0.4 mg/L+ZT 3.0 mg/L+AC0.2%，生根培养基为1/2MS+NAA0.2 mg/L+6-BA2.0 mg/L+AC0.2%，添加卡拉胶均为6 g/L， 蔗糖均为30 g/L，pH值调至5.8～6.0。培养基配方参见附录A。 5.1.2 灭菌与存放

　　采用高压灭菌锅121 ℃持续20 min灭菌后存放至超净工作台备用，按LY/T 1882的规定执行。 5.2 培养条件

　　应定期清洁培养室，及时清除污染材料。培养室温度26 ℃±2 ℃，相对湿度65%～70%，光照强度 1000 lx～2000 lx，日光照时长10 h～12 h。 5.3 种子萌发培养

　　用无菌解剖刀将消毒处理好的蒴果纵向切开,将其内部的细粉状种子均匀地撒播于培养基上;待培 养20 d～25 d，种子开始出现膨大，形成白色的原球茎。 5.4 增殖分化培养

　　将未分化的原球茎转接至增殖培养基上，培养20 d～25 d，原球茎分化出叶原基后长出叶片，形成 小苗;培养约35 d，小苗基部生成丛生原球茎，进一步分化出丛生苗3株～10株。 5.5 生根培养

　　选取2片以上舒展叶片、高1 cm～1.5 cm的芽苗，接种在生根培养基中诱导生根，每株苗长出1条～ 3条新根和1个～2个椭圆形或长圆形块茎。单株苗继续增殖成丛生苗，部分用于继代增殖，部分用于炼 苗种植。培养周期为30 d～35 d。

　　6 炼苗移植

　　6.1 基质与育苗袋 采用轻型基质(基质成分参照LY/T 2752相关条款执行)或腐殖土作基质，以塑料薄膜袋或无纺布

　　袋等为育苗袋，规格为8 cm×10 cm。移植前2 d对基质与育苗袋用50 %的多菌灵可湿性粉剂1000倍液淋 透杀菌。 6.2 炼苗

　　选取长出新根、球茎达0.2 cm～0.5 cm、叶片2片～3片的瓶苗移至炼苗棚内。炼苗10 d～15 d后将瓶 盖拧开，继续炼苗3 d～5 d。 6.3 洗苗

　　将经过炼苗的瓶苗和培养基一起倒入清水中洗净，注意避免损伤根系。 6.4 移植

　　2

　　DB 4413/T 64—2025 在基质中捅个小孔，小心将芽苗植入，用基质完全覆盖芽苗根部，不可大力按压基质以防伤苗;避 开夏季高温天气移植。 6.5 苗期管理 6.5.1 遮荫 移植后用透光度25%的遮阴网遮荫，45 d后用透光度50%的遮阴网遮荫。 6.5.2 水分 移植后即淋透水;后期做到见干见湿，保持基质湿润。 6.5.3 养分 小苗移植10 d后施薄肥，采用1 g/L的复合肥(N2-P2O5-K2O=15-15-15)水溶液淋施，每7 d～10 d一 次;移植30 d后，采用3 g/L的复合肥(N2-P2O5-K2O=15-15-15)水溶液淋施，每10 d～15 d一次。 6.5.4 除草 及时清除杂草。 7 病虫害防治 7.1 病害 苗期偶有根腐病危害，应及时清除病株，集中焚烧。用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液喷洒基质， 防止病原传播。 7.2 虫害 苗期偶有卷夜蛾或金龟子危害嫩叶和球茎，少量危害时人工捕杀，并用黑光灯或糖醋液诱杀成虫。 8 出圃 生长正常、无损伤、无病虫害、苗高≥10 cm的幼苗可以出圃。 9 档案管理 按GB/T 6001相关条款执行。

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　　附录A

　　(资料性)

　　橙黄玉凤花组织培养的培养基配方

　　橙黄玉凤花组织培养的培养基配方见表 A.1。

　　表A.1 橙黄玉凤花组织培养培养基配方

　　培养基成份

　　KNO3 NH4NO3 KH2PO4 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O Na2-EDTA MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O H3BO3

　　KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O

　　甘氨酸 VB1 VB6 VB3 肌醇 蔗糖

　　琼脂粉 NAA ZT 6-BA AC

　　种子萌发培养基(mg/L) 950 825 85 220 185 13.9

　　18.65 11.15

　　4.3 3.1 0.415 0.125 0.0125 0.0125

　　1 0.05 0.25 0.25

　　50 30000 5000

　　0.5 — — 0.2%

　　增殖培养基(mg/L) 950 825 85 220 185 13.9

　　18.65 11.15

　　4.3 3.1 0.415 0.125 0.0125 0.0125

　　1 0.05 0.25 0.25

　　50 30000 5000

　　0.4 3.0 — 0.2%

　　生根培养基(mg/L) 950 825 85 220 185 13.9 18.65 11.15 4.3 3.1 0.415 0.125

　　0.0125 0.0125

　　1 0.05 0.25 0.25 50 30000 5000 0.2 — 2.0 0.2%

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