GB/T 45221-2025 化学品 EASZY试验 利用转基因 tg（cyp19a1b：GFP）斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质
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- 标准类型：检验检测
- 标准语言：中文版
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资料介绍
ICS13.300
CCS A80
中华人民共和国国家标准
GB/T45221—2025
化学品 EASZY 试验 利用转基因tg
(cyp19a1b:GFP )斑马鱼胚胎通过
雌激素受体检测内分泌活性物质
Chemicals—EASZYassay—Detectionofendorineactivesubstances,acting
throughestrogenreceptors,usingtansgeictg (cyp19a1b :GFP )zebrafish
embryos
2025-01-24发布2025-05-01实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会发布
目 次
前言………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ
引言………………………………………………………………………………………………………… Ⅳ
1 范围……………………………………………………………………………………………………… 1
2 规范性引用文件………………………………………………………………………………………… 1
3 术语和定义、缩略语……………………………………………………………………………………… 1
4 试验原理………………………………………………………………………………………………… 2
5 受试物信息……………………………………………………………………………………………… 3
6 能力验证化学品………………………………………………………………………………………… 3
7 试验准备………………………………………………………………………………………………… 4
8 试验程序………………………………………………………………………………………………… 6
9 数据分析和结果评价…………………………………………………………………………………… 7
10 质量保证与质量控制…………………………………………………………………………………… 8
11 结果报告………………………………………………………………………………………………… 8
附录A (资料性) tg c(yp19a1b G:FP )基因构造……………………………………………………… 10
附录B(资料性) 通过诱导GFP表达来测定化学品产生雌激素活性的途径……………………… 11
附录C(资料性) EASZY试验流程…………………………………………………………………… 13
附录D(资料性) EASZY试验成像分析……………………………………………………………… 15
附录E(资料性) 96h后转基因斑马鱼体内荧光成像………………………………………………… 16
附录F(资料性) 转基因斑马鱼的体内成像:广角荧光显微镜……………………………………… 18
附录G (资料性) 转基因斑马鱼的体内成像:ImageJ中图像分析宏的使用示例…………………… 19
附录H (资料性) 数据报告和分析……………………………………………………………………… 24
附录I(资料性) 数据统计分析的流程图……………………………………………………………… 31
附录J(资料性) EASZY试验中的浓度-反应关系示例……………………………………………… 32
参考文献…………………………………………………………………………………………………… 38
Ⅰ
GB/T45221—2025
前 言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请 注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本文件起草单位:广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)、生态环境部固体废物
与化学品管理技术中心、广东省生物技术研究院(广东省实验动物监测中心)、中检科健(天津)检验检测
有限责任公司、清华大学、完美(广东)日用品有限公司。
本文件主要起草人:梅承芳、许玫英、许玉洁、李建军、窦从从、周小红、丰时运、王鹏、高亮、刘洪英、
曾国驱、刘超武、周丽丽、刘纯新、肖亿金、高彩霞、袁艺。
Ⅲ
GB/T45221—2025
引 言
EASZY[利用转基因tg (cyp19a1b :GFP )斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质]试验
是一种基于机制的体内筛选试验,旨在通过诱导cyp19a1b 启动子驱动的绿色荧光蛋白(GFP)的表
达,检测作为雌激素受体激动剂的内分泌活性物质。EASZY 试验可用于检测化学物质对转基因tg
(cyp19a1b :GFP )斑马鱼胚胎暴露96h的雌激素活性。附录A 描述了用于建立转基因品系的基因
结构。
cyp19a1b 基因编码的脑芳香化酶,是一种负责从雄激素中合成雌激素的酶。在鱼类中,cyp19a1b
基因的表达仅限于放射状胶质细胞,它是从胚胎期到成年期产生新神经元的祖代细胞。cyp19a1b 基因
的转录需要被激活的雌激素受体(ERs)、结合于雌激素反应元件(EREs)的配体-ER 复合物以及位于
cyp19a1b 基因启动子区域的半个EREs共同参与。cyp19a1b 调控还需要与胶质细胞x反应元件
(GxRE)结合的胶质细胞特异性因子与ERE序列的协同作用。GxRE在cyp19a1b 基因的细胞特异性
调控及其受雌激素的调控中发挥着重要作用。
除雌激素外,类固醇雄激素也可调控cyp19a1b 基因的转录活性。对于可芳构化的雄激素(如睾
酮),这种调控预示着它们可被芳构化为雌激素,随后与ERs结合并诱导cyp19a1b 的表达。而不可芳构
化的雄激素中,11酮睾酮无法诱导cyp19a1b 的表达;5α-二氢睾酮(DHT)则已被证实具有雌激素样活
性,它通过ER依赖性途径诱导cyp19a1b 的表达。这可能是由于DHT通过3β-羟基类固醇脱氢酶的作
用转化为一种已知的雌激素类固醇———β-二醇(见附录B)。
在斑马鱼胚胎的端脑、视前区和下丘脑中可检测到ERβ1和ERβ2mRNA 的表达,但对于本文件中
所处发育阶段的斑马鱼胚胎,在其大脑中未检测到ERα的转录体。这表明ERβ1和/或ERβ2可驱动芳
香化酶
CCS A80
中华人民共和国国家标准
GB/T45221—2025
化学品 EASZY 试验 利用转基因tg
(cyp19a1b:GFP )斑马鱼胚胎通过
雌激素受体检测内分泌活性物质
Chemicals—EASZYassay—Detectionofendorineactivesubstances,acting
throughestrogenreceptors,usingtansgeictg (cyp19a1b :GFP )zebrafish
embryos
2025-01-24发布2025-05-01实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会发布
目 次
前言………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ
引言………………………………………………………………………………………………………… Ⅳ
1 范围……………………………………………………………………………………………………… 1
2 规范性引用文件………………………………………………………………………………………… 1
3 术语和定义、缩略语……………………………………………………………………………………… 1
4 试验原理………………………………………………………………………………………………… 2
5 受试物信息……………………………………………………………………………………………… 3
6 能力验证化学品………………………………………………………………………………………… 3
7 试验准备………………………………………………………………………………………………… 4
8 试验程序………………………………………………………………………………………………… 6
9 数据分析和结果评价…………………………………………………………………………………… 7
10 质量保证与质量控制…………………………………………………………………………………… 8
11 结果报告………………………………………………………………………………………………… 8
附录A (资料性) tg c(yp19a1b G:FP )基因构造……………………………………………………… 10
附录B(资料性) 通过诱导GFP表达来测定化学品产生雌激素活性的途径……………………… 11
附录C(资料性) EASZY试验流程…………………………………………………………………… 13
附录D(资料性) EASZY试验成像分析……………………………………………………………… 15
附录E(资料性) 96h后转基因斑马鱼体内荧光成像………………………………………………… 16
附录F(资料性) 转基因斑马鱼的体内成像:广角荧光显微镜……………………………………… 18
附录G (资料性) 转基因斑马鱼的体内成像:ImageJ中图像分析宏的使用示例…………………… 19
附录H (资料性) 数据报告和分析……………………………………………………………………… 24
附录I(资料性) 数据统计分析的流程图……………………………………………………………… 31
附录J(资料性) EASZY试验中的浓度-反应关系示例……………………………………………… 32
参考文献…………………………………………………………………………………………………… 38
Ⅰ
GB/T45221—2025
前 言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请 注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本文件起草单位:广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)、生态环境部固体废物
与化学品管理技术中心、广东省生物技术研究院(广东省实验动物监测中心)、中检科健(天津)检验检测
有限责任公司、清华大学、完美(广东)日用品有限公司。
本文件主要起草人:梅承芳、许玫英、许玉洁、李建军、窦从从、周小红、丰时运、王鹏、高亮、刘洪英、
曾国驱、刘超武、周丽丽、刘纯新、肖亿金、高彩霞、袁艺。
Ⅲ
GB/T45221—2025
引 言
EASZY[利用转基因tg (cyp19a1b :GFP )斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质]试验
是一种基于机制的体内筛选试验,旨在通过诱导cyp19a1b 启动子驱动的绿色荧光蛋白(GFP)的表
达,检测作为雌激素受体激动剂的内分泌活性物质。EASZY 试验可用于检测化学物质对转基因tg
(cyp19a1b :GFP )斑马鱼胚胎暴露96h的雌激素活性。附录A 描述了用于建立转基因品系的基因
结构。
cyp19a1b 基因编码的脑芳香化酶,是一种负责从雄激素中合成雌激素的酶。在鱼类中,cyp19a1b
基因的表达仅限于放射状胶质细胞,它是从胚胎期到成年期产生新神经元的祖代细胞。cyp19a1b 基因
的转录需要被激活的雌激素受体(ERs)、结合于雌激素反应元件(EREs)的配体-ER 复合物以及位于
cyp19a1b 基因启动子区域的半个EREs共同参与。cyp19a1b 调控还需要与胶质细胞x反应元件
(GxRE)结合的胶质细胞特异性因子与ERE序列的协同作用。GxRE在cyp19a1b 基因的细胞特异性
调控及其受雌激素的调控中发挥着重要作用。
除雌激素外,类固醇雄激素也可调控cyp19a1b 基因的转录活性。对于可芳构化的雄激素(如睾
酮),这种调控预示着它们可被芳构化为雌激素,随后与ERs结合并诱导cyp19a1b 的表达。而不可芳构
化的雄激素中,11酮睾酮无法诱导cyp19a1b 的表达;5α-二氢睾酮(DHT)则已被证实具有雌激素样活
性,它通过ER依赖性途径诱导cyp19a1b 的表达。这可能是由于DHT通过3β-羟基类固醇脱氢酶的作
用转化为一种已知的雌激素类固醇———β-二醇(见附录B)。
在斑马鱼胚胎的端脑、视前区和下丘脑中可检测到ERβ1和ERβ2mRNA 的表达,但对于本文件中
所处发育阶段的斑马鱼胚胎,在其大脑中未检测到ERα的转录体。这表明ERβ1和/或ERβ2可驱动芳
香化酶