T/BPMA 30-2024 畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定 液相色谱-串联质谱法
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- 标准类型：综合团体标准
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-03-07
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资料介绍
ICS 67.120
CCS X 04
北京预防医学会团体标准
T/BPMA 30—2024
畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of food-borne stimulant drugs and progestins in meat— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method
2024 - 07 - 30 发布2024 - 07 - 30 实施
北京预防医学会 发布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）提出。
本文件由北京预防医学会归口。
本文件起草单位：北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心），北京市疾
病预防控制中心，北京市延庆区疾病预防控制中心。
本文件主要起草人：冯月超、刘艳、王建凤、郭巧珍、姚凯、张晶、林强、李晶晶、苏东霞。
T/BPMA 30—2024
1
畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定液相色谱-串联质谱法
1 范围
本文件描述了畜禽肉中40 种食源性兴奋剂和5 种孕激素含量测定的液质联用测定方法。
本文件适用于畜禽肉中40 种食源性兴奋剂和5 种孕激素含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法原理
样品中的被测物经0.5%乙酸乙腈溶液振荡提取，加入氯化钠和无水硫酸镁脱水离心。上清液采用
乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、十八烷基键合硅胶（C18）、中性氧化铝和无水硫酸镁净化。采用
液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。
5 试剂和材料
5.1 试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
5.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
5.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
5.1.3 无水硫酸镁（MgSO4）。
5.1.4 氯化钠（NaCl）。
5.1.5 冰乙酸（CH3COOH）：优级纯。
5.1.6 甲酸（HCOOH）：色谱纯，纯度≥88%。
5.1.7 乙酸铵（CH3COONH4）：优级纯。
5.1.8 中性氧化铝（Al2O3）：0.15 mm~0.30 mm（100 ~ 200 目），层析用。
5.1.9 提取液：取5 mL 冰乙酸加入乙腈，并用乙腈定容于1000 mL，混匀。
5.1.10 0.1%甲酸-5 mmol/L 乙酸铵水溶液：称取0.385 g 乙酸铵用水溶解，加入1.0 mL 甲酸，用水定容
至1000 mL。
5.1.11 复溶溶液：取0.1%甲酸-5 mmol/L 乙酸铵水溶液（5.1.10）90 mL，加入10 mL 甲醇混匀。
5.1.12 标准品：45 种被测化合物和9 种内标物的中英文名称和CAS 号信息见附录A，纯度≥95%。
T/BPMA 30—2024
2
5.1.13 标准储备溶液：准确称取附录A 中的标准品适量（相当于各被测物的有效成分10 mg），精密
称定，分别用甲醇适量使溶解并定容于10 mL，配制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备溶液。-18 ℃以
下避光储存，其中利尿剂（氨苯喋啶、螺内酯、坎利酮）保质期为3 个月，其余有效期为6 个月。
5.1.14 混合标准储备溶液：依据化合物的类别将被测物分成A~G 共7 组，见附录B，其中A-F 组为外
标，G 组为内标。用甲醇配制成7 个混合标准储备溶液，配制浓度见附录B。-18 ℃以下避光储存3 个
月。
5.1.15 内标混合标准中间溶液：取G 组内标混合标准储备液适量，用甲醇配制成0.1μg/mL ~ 0.4 μg/mL
的内标混合中间溶液，见附录B。
5.1.16 外标混合标准中间溶液：临用前分别取上述A~G 组混合储备溶液1.00 mL，用甲醇定容于10 mL
容量瓶，配制成外标混合中间溶液，浓度范围时0.1 μg/mL ~ 0.4 μg/mL，见附录B。
5.1.17 溶剂标准工作溶液：分别移取0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、0.8 mL、1.0 mL 外标混合中间
液于10 mL 容量瓶，均加入0.1 mL 内标混合标准中间液，用复溶溶液（5.1.11）定容至刻度，混匀。
5.2 材料
5.2.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径40 μm ~ 60 μm。
5.2.2 十八烷基键合硅胶（C18）：粒径40 μm ~ 60 μm。
5.2.3 净化管：分别称取吸附材料PSA（5.2.1）、C18（5.2.2）、中性氧化铝（5.1.8）各165 mg，无水
硫酸镁（5.1.3）900 mg 于10 mL 螺盖离心管中。
5.2.4 微孔滤膜：尼龙，0.22 μm。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
6.2 离心机：转速不低于8000 r/min。
6.3 氮气吹干仪。
6.4 超声波清洗器。
6.5 多管涡旋混匀仪。
6.6 涡旋混合器。
6.7 分析天平：感量0.01 g 和0.000 01 g。
7 试样制备和保存
7.1 试样制备
取500g 畜禽肉样品，绞碎均质后的供试样品，作为供试样品。
7.2 试样保存
-18 ℃以下保存。
8 测定步骤
T/BPMA 30—2024
3
8.1 样品的处理
8.1.1 提取
称取粉碎均质后的试样5.0 g（精确至0.01g）于50 mL 螺盖离心管中，加入40 μL 内标混合标准中
间溶液（5.1.15），加入5 mL 水，涡旋10 s 后，准确加入20 mL 提取液（5.1.9），于多管涡旋混匀仪
上震荡提取15 min，加入1.0 g 氯化钠（5.1.4）和4.0 g 无水硫酸镁（5.1.3），快速混匀，继续振荡10 min，
8000 r/min 离心5 min，上清液待净化。
8.1.2 净化
移取上清液10 mL 于装入净化剂的净化管（5.2.3）中，振荡10 min，8000 r/min 离心5 min。移取
上层净化液5 mL 于试管中，置于氮气吹干仪上于45 ℃以下吹干，加入1.0 mL 复溶溶液（5.1.11），
涡旋复溶，用0.22 μm 微孔滤膜（5.2.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。
8.2 基质标准工作溶液的制备
称取6 份不含被测物的阴性样品5.0 g（精确至0.01 g），不加内标，按照8.1.1 和8.1.2 的方法提取
净化，吹干，加入1.0 mL 溶剂标准工作溶液（5.1.17），涡旋复溶30 s，用微孔滤膜（5.2.4）过滤，供
液相色谱-串联质谱仪测定。
8.3 空白试验
除不加试样外，按8.1 中描述的步骤做空白实验。
8.4 仪器分析条件
8.4.1 液相色谱条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18反相液相色谱柱（2.1 mm×100 mm, 1.7 μm）或等效柱；
b) 柱温：30 ℃；
c) 进样量：5 μL；
d) 流动相：A为甲醇（5.1.1），B为0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸铵水溶液（5.1.10）。梯度洗脱条件
见表1。
表1 液相色谱梯度洗脱条件
时间（min） 流速（mL/min） A（%） B（%）
0.0 0.3 5 95
0.5 0.3 5 95
1.0 0.3 10 90
6.0 0.3 70 30
8.0 0.3 80 20
9.0 0.3 100 0
10.0 0.3 100 0
10.1 0.3 5 95
12.0 0.3 5 95
8.4.2 质谱条件
质谱参考条件如下：
T/BPMA 30—2024
4
a) 电离源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多重反应监测（MRM）；
d) 毛细管电压：0.5 kV；
e) 离子源温度：150 ℃；
f) 脱溶剂温度：450 ℃；
g) 脱溶剂气流量：650 L/h；
h) 锥孔气流量：50 L/h；
i) 碰撞气体：氩气；
j) 45种被测物及9种内标物色谱峰的保留时间及质谱参数见附录C。
8.5 定性判定
在相同试验条件下，试样溶液谱图中应呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测物质的质量色
谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的色谱峰保留时间偏差在±2.5%之内；试样色谱图中所选择的监测
离子对的相对丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表2 规定范围，则可判断试样
中存在对应的被测质。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 20~50（含） 10~20（含） ≤10
允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
8.6 定量测定
试样溶液和基质标准工作溶液（8.2），注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，以被测物浓度为横坐
标，以基质标准工作溶液中被测物峰面积与对应内标峰面积比为纵坐标，绘制标准工作曲线，做单点或
多点校准。试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器线性范围内。被测物和内标物标准溶液的
特征离子质量色谱图见附录D。
如果有阳性检出应采用现行有效的国家标准检测方法进一步确证。
9 结果计算和表述
试样中各被测物含量按照式（1）计算：
X = ?
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畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of food-borne stimulant drugs and progestins in meat— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method
2024 - 07 - 30 发布2024 - 07 - 30 实施
北京预防医学会 发布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）提出。
本文件由北京预防医学会归口。
本文件起草单位：北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心），北京市疾
病预防控制中心，北京市延庆区疾病预防控制中心。
本文件主要起草人：冯月超、刘艳、王建凤、郭巧珍、姚凯、张晶、林强、李晶晶、苏东霞。
T/BPMA 30—2024
1
畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定液相色谱-串联质谱法
1 范围
本文件描述了畜禽肉中40 种食源性兴奋剂和5 种孕激素含量测定的液质联用测定方法。
本文件适用于畜禽肉中40 种食源性兴奋剂和5 种孕激素含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法原理
样品中的被测物经0.5%乙酸乙腈溶液振荡提取，加入氯化钠和无水硫酸镁脱水离心。上清液采用
乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、十八烷基键合硅胶（C18）、中性氧化铝和无水硫酸镁净化。采用
液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。
5 试剂和材料
5.1 试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
5.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
5.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
5.1.3 无水硫酸镁（MgSO4）。
5.1.4 氯化钠（NaCl）。
5.1.5 冰乙酸（CH3COOH）：优级纯。
5.1.6 甲酸（HCOOH）：色谱纯，纯度≥88%。
5.1.7 乙酸铵（CH3COONH4）：优级纯。
5.1.8 中性氧化铝（Al2O3）：0.15 mm~0.30 mm（100 ~ 200 目），层析用。
5.1.9 提取液：取5 mL 冰乙酸加入乙腈，并用乙腈定容于1000 mL，混匀。
5.1.10 0.1%甲酸-5 mmol/L 乙酸铵水溶液：称取0.385 g 乙酸铵用水溶解，加入1.0 mL 甲酸，用水定容
至1000 mL。
5.1.11 复溶溶液：取0.1%甲酸-5 mmol/L 乙酸铵水溶液（5.1.10）90 mL，加入10 mL 甲醇混匀。
5.1.12 标准品：45 种被测化合物和9 种内标物的中英文名称和CAS 号信息见附录A，纯度≥95%。
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2
5.1.13 标准储备溶液：准确称取附录A 中的标准品适量（相当于各被测物的有效成分10 mg），精密
称定，分别用甲醇适量使溶解并定容于10 mL，配制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备溶液。-18 ℃以
下避光储存，其中利尿剂（氨苯喋啶、螺内酯、坎利酮）保质期为3 个月，其余有效期为6 个月。
5.1.14 混合标准储备溶液：依据化合物的类别将被测物分成A~G 共7 组，见附录B，其中A-F 组为外
标，G 组为内标。用甲醇配制成7 个混合标准储备溶液，配制浓度见附录B。-18 ℃以下避光储存3 个
月。
5.1.15 内标混合标准中间溶液：取G 组内标混合标准储备液适量，用甲醇配制成0.1μg/mL ~ 0.4 μg/mL
的内标混合中间溶液，见附录B。
5.1.16 外标混合标准中间溶液：临用前分别取上述A~G 组混合储备溶液1.00 mL，用甲醇定容于10 mL
容量瓶，配制成外标混合中间溶液，浓度范围时0.1 μg/mL ~ 0.4 μg/mL，见附录B。
5.1.17 溶剂标准工作溶液：分别移取0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、0.8 mL、1.0 mL 外标混合中间
液于10 mL 容量瓶，均加入0.1 mL 内标混合标准中间液，用复溶溶液（5.1.11）定容至刻度，混匀。
5.2 材料
5.2.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径40 μm ~ 60 μm。
5.2.2 十八烷基键合硅胶（C18）：粒径40 μm ~ 60 μm。
5.2.3 净化管：分别称取吸附材料PSA（5.2.1）、C18（5.2.2）、中性氧化铝（5.1.8）各165 mg，无水
硫酸镁（5.1.3）900 mg 于10 mL 螺盖离心管中。
5.2.4 微孔滤膜：尼龙，0.22 μm。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
6.2 离心机：转速不低于8000 r/min。
6.3 氮气吹干仪。
6.4 超声波清洗器。
6.5 多管涡旋混匀仪。
6.6 涡旋混合器。
6.7 分析天平：感量0.01 g 和0.000 01 g。
7 试样制备和保存
7.1 试样制备
取500g 畜禽肉样品，绞碎均质后的供试样品，作为供试样品。
7.2 试样保存
-18 ℃以下保存。
8 测定步骤
T/BPMA 30—2024
3
8.1 样品的处理
8.1.1 提取
称取粉碎均质后的试样5.0 g（精确至0.01g）于50 mL 螺盖离心管中，加入40 μL 内标混合标准中
间溶液（5.1.15），加入5 mL 水，涡旋10 s 后，准确加入20 mL 提取液（5.1.9），于多管涡旋混匀仪
上震荡提取15 min，加入1.0 g 氯化钠（5.1.4）和4.0 g 无水硫酸镁（5.1.3），快速混匀，继续振荡10 min，
8000 r/min 离心5 min，上清液待净化。
8.1.2 净化
移取上清液10 mL 于装入净化剂的净化管（5.2.3）中，振荡10 min，8000 r/min 离心5 min。移取
上层净化液5 mL 于试管中，置于氮气吹干仪上于45 ℃以下吹干，加入1.0 mL 复溶溶液（5.1.11），
涡旋复溶，用0.22 μm 微孔滤膜（5.2.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。
8.2 基质标准工作溶液的制备
称取6 份不含被测物的阴性样品5.0 g（精确至0.01 g），不加内标，按照8.1.1 和8.1.2 的方法提取
净化，吹干，加入1.0 mL 溶剂标准工作溶液（5.1.17），涡旋复溶30 s，用微孔滤膜（5.2.4）过滤，供
液相色谱-串联质谱仪测定。
8.3 空白试验
除不加试样外，按8.1 中描述的步骤做空白实验。
8.4 仪器分析条件
8.4.1 液相色谱条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18反相液相色谱柱（2.1 mm×100 mm, 1.7 μm）或等效柱；
b) 柱温：30 ℃；
c) 进样量：5 μL；
d) 流动相：A为甲醇（5.1.1），B为0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸铵水溶液（5.1.10）。梯度洗脱条件
见表1。
表1 液相色谱梯度洗脱条件
时间（min） 流速（mL/min） A（%） B（%）
0.0 0.3 5 95
0.5 0.3 5 95
1.0 0.3 10 90
6.0 0.3 70 30
8.0 0.3 80 20
9.0 0.3 100 0
10.0 0.3 100 0
10.1 0.3 5 95
12.0 0.3 5 95
8.4.2 质谱条件
质谱参考条件如下：
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4
a) 电离源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多重反应监测（MRM）；
d) 毛细管电压：0.5 kV；
e) 离子源温度：150 ℃；
f) 脱溶剂温度：450 ℃；
g) 脱溶剂气流量：650 L/h；
h) 锥孔气流量：50 L/h；
i) 碰撞气体：氩气；
j) 45种被测物及9种内标物色谱峰的保留时间及质谱参数见附录C。
8.5 定性判定
在相同试验条件下，试样溶液谱图中应呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测物质的质量色
谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的色谱峰保留时间偏差在±2.5%之内；试样色谱图中所选择的监测
离子对的相对丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表2 规定范围，则可判断试样
中存在对应的被测质。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 20~50（含） 10~20（含） ≤10
允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
8.6 定量测定
试样溶液和基质标准工作溶液（8.2），注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，以被测物浓度为横坐
标，以基质标准工作溶液中被测物峰面积与对应内标峰面积比为纵坐标，绘制标准工作曲线，做单点或
多点校准。试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器线性范围内。被测物和内标物标准溶液的
特征离子质量色谱图见附录D。
如果有阳性检出应采用现行有效的国家标准检测方法进一步确证。
9 结果计算和表述
试样中各被测物含量按照式（1）计算：
X = ?