DB44/T 2713-2025 陆生野生动物样品采集和保存技术规范

　　广东省地方标准

　　DB44/T 2713—2025

　　陆生野生动物样品采集和保存技术规范

　　Specification for collection and preservation of terrestrial wildlife samples

　　2025 - 07 - 28发布

　　2025 - 10 - 28实施

　　广东省市场监督管理局 发布

　　目次

　　前言 ................................................................................. II

　　1 范围 ............................................................................... 1

　　2 规范性引用文件 ..................................................................... 1

　　3 术语和定义 ......................................................................... 1

　　4 基本要求 ........................................................................... 1

　　5 准备 ............................................................................... 2

　　6 采集 ............................................................................... 3

　　7 记录 ............................................................................... 5

　　8 废弃物处理 ......................................................................... 5

　　9 运输 ............................................................................... 5

　　10 保存 .............................................................................. 5

　　11 档案管理 .......................................................................... 5

　　附录A(资料性) 器材与试剂 ........................................................... 6

　　附录B(资料性) 样品采集信息表 ....................................................... 8

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　　II

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件由广东省林业局提出并组织实施。

　　本文件由广东省林业标准化技术委员会(GD/TC 146)归口。

　　本文件起草单位：广东省野生动物监测救护中心、广州动物园。

　　本文件主要起草人：侯方晖、周妞、单芬、王志广、杨光大、陈武、王晨、梅隐、肖嘉杰、张学东、吴亚江、吕梦娜、王鹤、陈路漫、黄万和。

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　　陆生野生动物样品采集和保存技术规范

　　1 范围

　　本文件规定了陆生野生动物样品采集和保存的基本原则、准备、采集、记录、废弃物处理、运输、保存和档案管理等方面的要求。

　　本文件适用于野外生长以及野生动物饲养机构圈养的哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类动物等陆生动物样品采集与保存操作。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB 19489 实验室生物安全通用要求

　　GB 19781 医学实验室安全要求

　　GB/T 36195 畜禽粪便无害化处理技术规范

　　GB/T 37864—2019 生物样本库质量和能力通用要求

　　GB/Z 44314—2024 生物技术 生物样本保藏 动物生物样本保藏要求

　　LY/T 2359—2014 陆生野生动物疫源疫病监测技术规范

　　NY/T 541—2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

　　NY/T 561—2024 动物炭疽诊断技术

　　NY/T 4302 动物疫病诊断实验室档案管理规范

　　SN/T 3592 实验室化学药品和样品废弃物处理的标准指南

　　WS/T 225 临床化学检验血液标本的收集与处理

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　样品 sample

　　指开展陆生野生动物临床检测、疫病监测、异常死亡原因分析、资源库建立、资源利用、物种分类学鉴定等而采集的与陆生野生动物相关的粪便、拭子、血液等生物材料。

　　4 基本要求 烈性传染病排除

　　急性死亡动物，怀疑发生炭疽杆菌等烈性传染病，按NY/T 561—2024中5的要求执行。排除炭疽感染后，在兽医指导下进行采样或解剖操作。

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　　2

　　合理选择采样方法

　　以陆生野生动物为来源的生物样品，在样品采集、处置及保存过程前，应了解、掌握采样区域内动物的种类数量、活动规律、生活习性及保定方法。应根据采样的目的、内容和要求合理选择样品采集的种类、数量、部位与抽样方法。 采样时限

　　若采集死亡动物的病料，宜于动物死亡后2 h内采集。无法实现时，夏天不应超过6 h，冬天不应超过24 h。 无菌操作

　　采样过程应注意无菌操作，刀、剪、镊子、器皿、注射器、针头等采样用具和器械应事先严格灭菌,每种样品应单独采集。 有效性

　　确保采集的样品能反映动物真实的生理或病理状态，能满足正常生理状况或疾病的预测、预防、诊断、利用、研究和保存需求，了解野生动物生理或疫病的发生和变化规律。样品信息明确，采集过程操作符合规范。 减少应激和损害

　　活体动物采样时，应避免过度刺激或损害动物，不违反动物伦理，保障动物福利。也应避免对操作人员造成危害。 生物安全防护

　　操作人员应加强个人防护，判定野生动物健康状况，如有传染、扩散风险，应按照LY/T 2359—2014中9的要求穿戴必须的个人卫生安全防护装备(如戴防护服、手套、护目镜等)，严格遵守生物安全操作的相关规定，严防人兽共患病感染;采样完成后，应做好环境消毒以及动物或组织的无害化处理，避免污染环境，防止疫病传播。

　　5 准备 人员

　　5.1.1

　　操作人员应经过专业培训或从事相关工作，掌握动物保定技巧、采样程序和操作技术方法。

　　5.1.2

　　每次采样操作不宜少于两人。

　　5.1.3

　　操作人员能熟悉所用器材、耗材和试剂的特性和使用。

　　5.1.4

　　保障操作人员安全，对活体陆生野生动物，应按照GB/Z 44314—2024中附录B.1实施必要的物理或化学保定措施。

　　5.1.5

　　操作人员宜通过防火、防毒、防爆及其他应急措施培训等，确保在出现意外时能够立即采取有效措施。 场所

　　宜在洁净、消毒、无污染的环境下采集样品。采样工作结束后，应对场所及环境消毒灭菌。手术室、解剖室、实验室等封闭工作场所，还应保持洁净并经常通风换气。

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　　3

　　工具器材

　　5.3.1

　　根据采集样品的目的，选择适合的工具、器材，以及适于样品保存的容器、试剂和记号笔等。器材与试剂见附录A。

　　5.3.2

　　直接接触样品的采样器材、器械应符合NY/T 541的要求，保证无菌;用于核酸提取的样品的器材均需洁净无菌，且无DNA酶、RNA酶污染。 保存液

　　应根据所采样品的种类和要求，准备不同类型并分装成适量的保存液，如PBS缓冲液、30%甘油PBS缓冲液、灭菌肉汤、琼脂平板、核酸保存液、运输培养基和组织保存液等。

　　6 采集 一般要求

　　6.1.1

　　应根据动物大小、生理状态、健康状态以及检测目的等信息，确定样品采集方案、采集量，以及使用的工具、器械和容器等。

　　6.1.2

　　样品采集前，动物宜避免使用抗生素或类固醇类等药物，如不可避免，宜推迟取样或详细记录用药情况。

　　6.1.3

　　样品应洁净、无异物污染及交叉污染。宜根据采样需求，选用无菌生理盐水、肥皂水、1‰高锰酸钾水溶液或1‰苯扎溴铵(新洁尔灭)冲洗体表、肛门、生殖道、鼻腔、口腔、外阴部和尿道口等部位，再用无菌纱布或无菌干棉球拭干。

　　6.1.4

　　在采集过程中，如不可避免产生污染，宜先取洁净部位再取污染部位。

　　6.1.5

　　发生病变部位的样品采集，尽量覆盖正常部位和病变部位。

　　6.1.6

　　样品采集后，将样品置于无菌保存容器(离心管、冻存管、收集管、收集杯、采集杯、采集袋等)内，并标签贴于容器外壁，使用防水标记笔记录样品编号，避免脱落。

　　6.1.7

　　采集的样品应做好备份，满足送检、留存备案等需求。

　　6.1.8

　　需要冷冻保存的样品，应避免反复冻融。

　　6.1.9

　　样品编号应具有唯一性，在设计样品编号时保持统一性和持续性。可将多种信息用数字化的形式在编号中体现。 不同类型样品的采集

　　6.2.1 拭子

　　6.2.1.1

　　选择适合采集部位大小、长度的拭子，从包装尾部打开，不应触碰拭子头部，可用无菌生理盐水润湿拭子，将拭子插入待采样部位2 cm～3 cm后压在粘膜上旋转2～3圈沾取分泌物，直至拭子完全浸润。打开拭子采集管，将拭子头部完全放入采集管或浸入采集管的保存液中，剪断或折断拭子，使整个头部和一部分杆部留在拭子采集管中，盖严盖子。

　　6.2.1.2

　　采集肛拭子时，宜去掉过大的粪便(>0.5 cm);采集口、咽拭子时，宜避免粘取到黏膜表面杂质或病损表面分泌物。如遇污染，应弃掉污染拭子，取第二根拭子在采样部位用力擦拭。

　　6.2.2 皮肤及附属物

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　　6.2.2.1

　　皮肤样品：宜根据需求，使用手术刀或手术剪采取正常或病变部位的皮肤。采集用于真菌、寄生虫检测的样品时，使用无菌稍钝的刀片，顺着被毛生长方向轻刮表层皮屑(检测真菌)或深层皮屑至轻微出血(疥螨等外寄生虫)，取样完毕后用碘酒处理取样部位。

　　6.2.2.2

　　毛发、羽毛、皮张、蛇蜕等附属物样品：使用剪刀轻轻剪下，宜保持毛发或羽毛的完整性。如有必要，应保证毛囊或羽毛根完整。

　　6.2.3 血液

　　6.2.3.1

　　猪、牛、羊、马、禽、犬、猫等动物的血液样品的采集与处理可按照NY/T 541—2016中6.1规定执行。

　　6.2.3.2

　　宜避开炎症、水肿、发绀、给药等部位，消毒采血部位，待动物相对放松后进行穿刺，使用无菌采血针从适宜部位(如颈静脉、尾静脉、眼窝血管丛、末梢等部位)采集，保持血流畅通，采集后立即注入收集管、抗凝管或血培养瓶，采集过程注意避免污染。在采血部位覆盖纱布或药棉并压迫30 s～60 s至不流血，并观察动物状态。

　　6.2.4 粪便

　　液状粪便采集水样便或含絮状物的液状粪便，宜使用无菌吸管吸取;成形粪便，宜从表面、深处等多点位采集标本。

　　6.2.5 尿液

　　宜用尿液收集杯直接接取中段尿液。如无条件直接接取，宜在清洁消毒后的地面，用无菌吸管吸取新鲜尿液。

　　6.2.6 精液

　　采用假阴道、人工按摩或电刺激等方法采集精液。分段射精动物，宜接取富含精子部分的精液。

　　6.2.7 胃内容物

　　6.2.7.1

　　采集活体动物胃液样品时，宜用石蜡油润滑消毒后的多孔胃管的前段，沿口腔或鼻孔插入胃管，伴随吞咽动作顺势将胃管向前推进，缓慢轻轻地插入，到达胃大弯粘液区，以注射器或负压泵接于胃管外端持续抽吸胃液，抽满后注入容器内，再接管继续抽吸，标记抽吸量。

　　6.2.7.2

　　采集反刍动物胃内容物样品时，可当食团从食道逆流入口腔时，立即开口拉住舌头，伸入口腔即可取出少量的瘤胃内容物。

　　6.2.7.3

　　采取死亡动物胃内容物样品时，可在剖解过程中通过食道或胃壁，使用无菌吸管吸取胃液，或者使用镊子采集胃内容物。

　　6.2.8 液体病料

　　6.2.8.1

　　封闭性部位的液体病料：应用碘酊或75%的乙醇消毒，使用灭菌注射器或吸管抽取或吸取深部的液体病料。

　　6.2.8.2

　　开放性部位的液体病料，应用无菌生理盐水冲洗病灶表面，使用无菌棉签头部沾取液体病料。大面积创伤感染可取感染组织块或沾有脓汁的内层敷料送检。

　　6.2.8.3

　　瘘管的液体病料，可在无菌条件下取组织碎片。

　　6.2.8.4

　　组织或脏器内的液体病料，宜用烫烙法消毒，从烫烙部位抽取、吸取或蘸取病料。

　　6.2.9 骨骼

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　　6.2.9.1

　　可用骨钳截取所需骨骼样品，置于无菌容器中。

　　6.2.9.2

　　需要完整的骨骼标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包入浸过5%石碳酸溶液的纱布中，装入密闭容器。

　　6.2.10 组织

　　宜在无菌条件下，使用手术刀或手术剪取适合大小的新鲜组织或内脏组织块。

　　7 记录

　　样品采集同时应填写野生动物样品采集信息表。标签和采集信息表上的样品编号需保持一致。

　　样品采集信息表宜包括以下内容(见B.1)：样品来源、采集日期及时间、采集地点、样品编号、动物种属、动物个体编号、性别、年龄或生长周期、样品类型、动物体况、保存方式、采样人姓名等;如为圈养野生动物，可增加呼名、医疗史等信息。

　　样品采集信息表应一式两份，一份随样品转移，另一份存档保存。

　　样品采集信息表宜电子信息化，必要时建立生物样本库，以便管理、查阅和追溯。

　　8 废弃物处理

　　样品采集时产生的废弃样品及其它废弃物应按照GB 19489、GB 19781、GB/T 36195、SN/T 3592、WS/T 225的有关规定进行无害化处理。重复使用的器材，使用后需消毒灭菌处理。

　　9 运输

　　将样品与采集记录表、样品标记等记录内容进行核对，核对无误后，宜将样品分类装箱转运;样品箱宜有“请勿倒置”和“易碎物品”等明显标识。样品运输的其他要求按照NY/T 541—2016中9的要求执行。

　　10 保存

　　用于细菌检测的样品，放入30%～50%甘油缓冲溶液中，于4 ℃可保存24 h;超过24 h时，宜置于-20℃以下冷冻保存。

　　用于寄生虫检验的样品，于4 ℃可保存24 h;超过24 h时，宜置于-20℃以下冷冻保存。

　　用于核酸检测的样品，放入核酸保存液中，于4 ℃可保存48 h;超过48 h时，宜置于-80℃或液氮中冷冻保存。经过核酸保存液保存的样品，仅用于核酸检测，不应用于其他目的的检测。

　　用于蛋白检测的样品，于-20 ℃可短期保存;长期保存时，宜置于-80℃冰箱或液氮中。

　　用于细胞培养的样品，放入组织保存液中，于4℃可保存24 h～48 h，无法长期保存。

　　用于电镜检测的样品，放入2.5%戊二醛固定液中，于4 ℃保存。

　　用于精液活性检测的样品，宜保存在37℃水浴中转运并及时检测，无法长期保存。

　　其他样品的保存可参考GB/Z 44314—2024中附录表D.1部分的相关内容。

　　11 档案管理

　　陆生野生动物生物样品的档案管理宜参考GB/T 37864—2019中7.10、NY/T 4302等相关要求执行。

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　　A

　　A

　　附录A (资料性) 器材与试剂

　　A.1 器材

　　A.1.1

　　粪便采集盒/管：容积15 mL、20 mL、40 mL，内附棉签或采集匙。

　　A.1.2

　　尿液收集杯：容积20 mL、40 mL、60 mL，螺旋盖。

　　A.1.3

　　尿液离心管：容积5 mL、7 mL，螺旋盖，尖底。

　　A.1.4

　　集精杯：不锈钢内胆或玻璃内胆保温。

　　A.1.5

　　采样杯：容积100 mL、200 mL。

　　A.1.6

　　血培养瓶：标准需氧瓶、标准厌氧瓶、树脂需氧瓶、树脂厌氧瓶、儿童树脂瓶、含溶血素厌氧瓶、含溶血素分支杆菌/真菌瓶，在2℃～25℃环境中贮存。

　　A.1.7

　　灭菌袋(管)。

　　A.1.8

　　拭子采集管、无菌拭子。

　　A.1.9

　　无菌试管、试管架、无菌吸管。

　　A.1.10

　　量杯：量程10 mL～200 mL。

　　A.1.11

　　移液器：量程100 μL～1 000 μL，增量10 μL。

　　A.1.12

　　接种针、接种环。

　　A.1.13

　　酒精灯。

　　A.1.14

　　离心管：容积10 mL、15 mL、50 mL，圆底、尖底，螺口、扣盖。

　　A.1.15

　　离心机：半径22.5 cm、3 000 r/min，离心时相对离心力为2 260 g。

　　A.1.16

　　无菌平皿。

　　A.1.17

　　载玻片、盖玻片、推玻片(推玻片是边缘平滑的载玻片或者其他玻片)。

　　A.1.18

　　一次性使用末梢血采血管：具备量程5 mL、10 mL、15 mL、20 mL。添加抗凝剂(EDTA-K2、EDTA-K3、EDTA-Na2、肝素钠、肝素锂、枸橼酸钠、草酸钾/氟化物、肝素/氟化物)、血液凝固促进剂或血清分离剂等用途。

　　A.1.19

　　一次性使用无菌采血针：全长40 mm，不锈钢材质，单独灭菌包装。

　　A.1.20

　　一次性无菌注射器：具备量程1 mL～50 mL，环氧乙烷消毒。

　　A.1.21

　　皮肤打孔器/取样器：直径1.2 mm、2.0 mm、3.0 mm。

　　A.1.22

　　灭菌胃管。

　　A.1.23

　　手术刀、手术剪、镊子、止血钳、弯盘。

　　A.1.24

　　无菌棉签、无菌棉球、无菌纱布。

　　A.1.25

　　一次性无菌口罩、一次性无菌N95口罩。

　　A.1.26

　　PE手套、一次性薄膜手套、封口膜。

　　A.1.27

　　保温箱、保温瓶、冰袋、干冰桶。

　　A.1.28

　　转运箱：容积30 L、45 L、60 L等。

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　　A.1.29

　　护目镜、防护服。

　　A.1.30

　　听诊器。

　　A.1.31

　　液氮罐：10 L、15 L、20 L等容量。

　　A.2 试剂

　　A.2.1

　　生理盐水：氯化钠浓度0.9%(哺乳类动物)、0.75%(鸟类动物)、0.65%(两栖类动物)。或任氏(Ringer's)生理盐水(变温动物，尤其常用于两栖类)、乐氏(Locke's)生理盐水(恒温动物，尤其常用于哺乳类)。

　　A.2.2

　　磷酸盐缓冲生理盐水：0.01 mol/L pH 9.0磷酸盐-生理盐水缓冲液，250 mL/瓶。

　　A.2.3

　　DNA保存液：粪便、尿液、血液、拭子、动物组织等DNA保存液，市售试剂，4 ℃保存。

　　A.2.4

　　RNA保存液：市售试剂，4℃保存。

　　A.2.5

　　精液保存液：市售保护剂或自主配方保护剂，以糖类、盐类、抗生素、抗氧化剂及其他保护剂为主要成分，-20℃保存。

　　A.2.6

　　转运培养基：市售试剂，4℃保存。

　　A.2.7

　　血培养基：含5%脱纤维羊血的营养琼脂培养基，市售试剂，4℃保存。。

　　A.2.8

　　高锰酸钾：分析纯。

　　A.2.9

　　无水乙醇：分析纯。

　　A.2.10

　　75%酒精：市售。

　　A.2.11

　　石蜡油：分析纯。

　　A.2.12

　　福尔马林：10%中性福尔马林固定液。

　　A.2.13

　　多聚甲醛：市售试剂，室温保存。

　　A.2.14

　　利多卡因膏剂：复方制剂，每克本品含丙胺卡因25 mg，利多卡因25 mg。

　　A.2.15

　　苯扎溴铵或新洁尔灭：苯扎溴铵，纯度95%，市售试剂，5 g/瓶、10 g/瓶、50 g/瓶等规格;新洁尔灭，市售试剂，有效成分苯扎溴铵 27 g/L～33 g/L的液体。常温保存。使用蒸馏水稀释至适宜浓度：创面消毒用0.01%溶液，皮肤及粘膜消毒用0.1%溶液，手术前洗手用0.05%～0.1%溶液浸泡5分钟;手术器械消毒用0.1%溶液(内加0.5%亚硝酸钠以防生锈)煮沸15分钟，再浸泡30分钟;0.005%以下溶液作膀胱和尿道灌洗;0.025‰溶液作膀胱保留液。

　　A.2.16

　　含血清的细胞培养基：根据不同种属源和/或组织特性，选择适合血清浓度及类型的商用细胞培养基。

　　A.2.17

　　组织保存液：市售试剂，4℃保存。

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　　B

　　B

　　附录B (资料性) 样品采集信息表

　　陆生野生动物样品采集信息表见表B.1。

　　表B.1 野生动物样品采集信息表

　　采集时间

　　采集单位

　　采集、填表人

　　动物种属

　　是否迁徙物种

　　标记/环号/呼名

　　采样地点

　　生境类型

　　地理坐标

　　野生动物基本

　　信息

　　性别

　　年龄

　　体重

　　动物体况及医疗

　　免疫状况

　　野生动物来源

　　情况

　　捕获/养殖时间

　　捕获/养殖地点

　　饲料、饮水来源

　　养殖区附近的其他动物情况

　　有无与家养动物接触史

　　野生动物种群

　　状况

　　种群数量

　　整体状态

　　有无异常表现

　　异常动物占比

　　与其密切接触的其他动物免疫情况

　　采样动物处理

　　情况

　　备注

　　序号

　　样品编号

　　样品类型

　　样品数量

　　样品描述

　　容器和保存

　　1

　　2

　　3

　　4

　　5

　　6

　　说明：

　　1 编号：建议规则为行政区划代码+年度+三位流水号，如 420000+2024+001。

　　2 采集时间：明确采样的年、月、日、时间。

　　3 地理坐标：注明地理坐标体系，经纬度精确到秒。

　　4 动物体况及医疗：动物的健康状况、医疗史、用药情况、病理剖检样品采集应注明死亡时间、剖检时间等。

　　5 样品数量：即取样动物的数量。

　　6 样品类别：为粪便、鼻/咽/肛拭子、血液、尿液、皮肤、羽毛、胃液、脓液、精液、组织或者脏器等。

　　7 样品描述：动物的临床表观、脏器病变情况及其他性状。

　　8 容器和保存：样品的包装材质(如各规格离心管、样品收集袋等)和保存条件(如常温、4℃、-80℃、液氮等)。