DB41/T 602-2025 蝴蝶兰组织培养技术规程

　　河南省地方标准

　　DB41/T 602—2025

　　代替 DB41/T 602—2009

　　蝴蝶兰组织培养技术规程

　　2025 - 08 - 08发布

　　2025 - 11 - 07实施

　　河南省市场监督管理局 发布

　　DB41/T 602—2025

　　I

　　目次

　　前言 ................................................................................. II

　　1 范围 ............................................................................... 1

　　2 规范性引用文件 ..................................................................... 1

　　3 术语和定义 ......................................................................... 1

　　4 设施设备 ........................................................................... 1

　　5 组培技术 ........................................................................... 2

　　6 炼苗移栽 ........................................................................... 3

　　7 档案管理 ........................................................................... 4

　　附录A(规范性) 不同培养阶段培养基配方 ............................................... 5

　　附录B(资料性) 培养物异常表现及处理 ................................................. 6

　　DB41/T 602—2025

　　II

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件代替DB41/T 602—2009《蝴蝶兰组织培养技术规程》，与DB41/T 602—2009相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

　　a)

　　增加了“术语和定义”一章(见第3章);

　　b)

　　增加了“蝴蝶兰”的定义(见3.1);

　　c)

　　更改了“接种设备”(见4.1.2.4，2009年版的3.1.2.4);

　　d)

　　更改了“基本培养基”(见5.1.1，2009年版的4.2.1);

　　e)

　　将“母液配制”更改为“植物生长调节剂母液配制”，并将2009年版的有关内容更改后纳入(见5.1.2，2009年版的4.2.2);

　　f)

　　更改了“培养基分装”(见5.1.4，2009年版的4.2.3.2);

　　g)

　　更改了“培养条件”(见5.2，2009年版的4.7);

　　h)

　　更改了“外植体选择与处理”(见5.3，2009年版的4.3.1);

　　i)

　　删除了“种胚培养选择与处理”(见2009年版的4.3.2);

　　j)

　　增加了“花梗腋芽诱导”(见5.4);

　　k)

　　增加了“丛生芽增殖中母苗的处理”(见5.5);

　　l)

　　更改了“丛生芽增殖培养基及培养方式”(见5.5，2009年版的4.5);

　　m)

　　增加了“继代增强培养”(见5.6);

　　n)

　　更改了“生根培养基”(见5.7，2009年版的4.6);

　　o)

　　更改了“温室消毒”(见6.1，2009年版的5.1);

　　p)

　　增加了“移栽标准”(见6.2);

　　q)

　　更改了“炼苗方式”(见6.2，2009年版的5.2);

　　r)

　　更改了“移栽时的环境控制”(见6.3.1，2009年版的5.4.1);

　　s)

　　更改了“移栽要求”(见6.3.2，2009年版的5.3.1);

　　t)

　　增加了“档案管理”一章(见第7章);

　　u)

　　更改了“附录A”(见附录A，2009年版的附录A);

　　v)

　　删除了“附录B”(见2009年版的附录B);

　　w)

　　更改了“附录C”(见附录B，2009年版的附录C)。

　　本文件由河南省林业局提出并归口。

　　本文件起草单位：郑州市农业科技研究院、济源市农业科学院、郑州市丰盈园艺有限公司。

　　本文件主要起草人：杨录军、王梅、王俊、冯建、尹国红、蒋拴丽、李铭、杨书才、张果、王世尧、赵玉安、王瑞华、邵慧宇、陈丽、牛小沛、刘星明、张月玲。

　　本文件于2009年首次发布，本次为第一次修订。

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　　1

　　蝴蝶兰组织培养技术规程

　　1 范围

　　本文件规定了蝴蝶兰组织培养技术术语和定义、设施设备、组培技术、炼苗移栽和档案管理等内容。

　　本文件适用于蝴蝶兰组织培养。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备

　　GB/T 8321.10 农药合理使用准则(十)

　　GB/T 28683 蝴蝶兰栽培技术规程

　　GB/T 28684 蝴蝶兰种苗质量等级

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　蝴蝶兰

　　蝴蝶兰(Phalaenopsis)，兰科附生草本。根肉质，发达，从茎的基部或下部的节上发出，长而扁。茎短，具少数近基生的叶。叶质地厚，扁平，椭圆形、长圆状披针形至倒卵状披针形，通常较宽，基部多少收狭，具关节和抱茎的鞘，花时宿存或花期在旱季时凋落。花序侧生于茎的基部，直立或斜出，分枝或不分枝，具少数至多数花。

　　4 设施设备

　　4.1 组培设施与设备

　　4.1.1 组培设施

　　洗涤室、灭菌室、培养基配制室、无菌接种室、培养室和炼苗移栽室等。

　　4.1.2 仪器设备

　　4.1.2.1 洗剂室

　　主要有水槽、塑料框、干燥箱、晾瓶架等。

　　4.1.2.2 灭菌室

　　主要有高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、烘干箱等。

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　　2

　　4.1.2.3 培养基配制室

　　主要有电子天平、量筒、移液管、烧杯、容量瓶、酸度计、冰箱、实验台等。

　　4.1.2.4 无菌接种室

　　主要有超净工作台、消毒器、手术刀、镊子、剪刀等。

　　4.1.2.5 培养室

　　主要有培养架、控温控湿控光设备等。

　　4.2 炼苗移栽设施

　　4.2.1 温室要求

　　能调节温度、湿度和光照等环境条件。

　　4.2.2 温室设施

　　主要有加温系统、保温系统、降温系统、遮阳系统、内循环系统、通风系统、灌溉设备和栽培床等。

　　5 组培技术

　　5.1 培养基配制

　　5.1.1 基本培养基

　　MS干粉培养基2.5 g/L+多种维生素及微量元素合成药剂1.5 g/L+肌醇0.125 g/L。

　　5.1.2 植物生长调节剂母液配制

　　分别称取1 g6-苄胺基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)，用1 mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液20 mL溶解，加蒸馏水定容至1 L，储存于棕色试剂瓶，置于4 ℃冰箱保存备用。试剂配制按照GB/T 603的规定执行。

　　5.1.3 配制

　　各阶段培养基的配制按附录A执行。

　　5.1.4 分装

　　用去离子水(电导率(EC)≤0.3 mS/cm)将培养基定容至所需体积，搅拌均匀，用1 mol/L NaOH溶液或1 mol/L盐酸(HCl)溶液调节pH到5.2～5.8，分装至培养容器，封口。

　　5.1.5 灭菌

　　将分装好的培养基放入高压灭菌锅内灭菌(灭菌时灭菌锅内压力为0.11 Mpa，温度为121 ℃，压力温度达到指标后灭菌20 min)。无菌水、接种工具(手术刀、镊子、垫纸等)均用此法灭菌。灭菌后的培养基和无菌水从制备好到使用间隔时间不超过20 d。

　　5.2 培养条件

　　光照强度2 500 lx～3 000 lx，光照时间12 h/d，温度25 ℃±2 ℃。

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　　3

　　5.3 外植体选择与处理

　　选取生长健壮的花梗，切取带有腋芽的节段，腋芽上下各留2 cm，用75%乙醇喷湿，装入适宜的容器中，移至超净工作台上，用75%乙醇浸泡1 min，然后用有效氯浓度为0.5%的次氯酸钠(NaClO)溶液浸泡20 min～25 min，在此期间，轻微摇晃灭菌容器8～10次。除去腋芽苞片，再用有效氯浓度为0.5%的NaClO溶液浸泡1 min～2 min，最后用无菌水冲洗3～4次。

　　5.4 腋芽诱导

　　在无菌纸上，用手术刀以腋芽为中心两端各切掉1 cm，将花梗腋芽茎段正向插接到芽诱导培养基中，置于培养室。接种后45 d～60 d腋芽即可萌发长成两叶一心小芽。

　　5.5 丛生芽增殖

　　用手术刀切下小芽，切掉1/3的上部叶片，接种到丛生芽增殖培养基中。培养30 d～35 d芽周围长出丛生芽，将丛生芽切分继续转接继代培养。继代不超过10代，或者达到所需数量即可进行增强培养。

　　5.6 继代增强培养

　　将继代培养的无根芽切分，按高度分级(≥1 cm为一级、0.5 cm～1 cm为二级、≤0.5 cm为三级)接种到继代增强培养基中。培养时间25 d～30 d。

　　5.7 生根培养

　　把增强培养的无根芽接种到生根培养基中，生根周期为60 d～70 d。

　　5.8 异常处理

　　不同培养阶段培养物的异常表现、可能原因及处理参照附录B。

　　6 炼苗移栽

　　6.1 温室消毒

　　移栽前15 d，用0.5%高锰酸钾溶液或50%多菌灵可湿性粉剂1 000倍液对温室和工具消毒。农药使用按照GB/T 8321.10的规定执行。

　　6.2 炼苗

　　达到移栽标准时(叶展7 cm～8 cm，两叶一心以上，叶色正常，根3～5条，根长1 cm～5 cm，下叶无黄化，植株形态一致)，将生根苗连同容器一起置于移栽温室的栽培床上，放置15 d～20 d，光照强度保持5 000 lx～8 000 lx，温度25 ℃±3 ℃。

　　6.3 移栽

　　6.3.1 环境控制

　　环境温度控制在25 ℃±3 ℃，空气湿度保持80%～90%，光照强度5 000 lx～10 000 lx。

　　6.3.2 移栽要求

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　　出瓶前将水苔用50%多菌灵可湿性粉剂1 000倍液或75%百菌清可湿性粉剂1 000倍液浸泡至充分吸水，脱水至手握无水滴下即可移栽。操作按照GB/T 28683的规定执行。取出生根苗，去除粘附的培养基，按大小分级。分级按照GB/T 28684的规定执行。用水苔包裹幼苗根部栽植到穴盘中间。

　　6.3.3 移栽苗管理

　　按照GB/T 28683的规定执行。

　　7 档案管理

　　记录蝴蝶兰种苗及化学试剂的来源、花梗腋芽采集的时间及部位、培养基配方、各阶段状态及生长周期、环境信息、炼苗移栽、异常表现及处理等生产过程中各个环节的信息。档案保存期不低于三年。

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　　5

　　A

　　A

　　附录A (规范性) 不同培养阶段培养基配方

　　表A.1规定了不同培养阶段培养基配方。

　　表

　　A.1 不同培养阶段培养基配方

　　成分

　　腋芽诱导培养基(1L)

　　丛生芽增殖培养基(1L)

　　继代增强培养基(1L)

　　生根培养基(1L)

　　MS干粉培养基

　　2.5 g

　　2.5 g

　　2.5 g

　　2.5 g

　　多种维生素及微量元素合成药剂

　　1.5 g

　　1.5 g

　　1.5 g

　　1.5 g

　　肌醇

　　0.125 g

　　0.125 g

　　0.125 g

　　0.125 g

　　6-BA

　　1.0 mL～2.0 mL

　　2.5 mL～3.5 mL

　　—

　　—

　　NAA

　　0.5 mL

　　0.5 mL

　　—

　　0.5 mL～1.0 mL

　　香蕉泥

　　—

　　—

　　150.0 g

　　50.0 g

　　土豆泥

　　—

　　100.0 g

　　—

　　50.0 g

　　蛋白胨

　　—

　　—

　　1.0 g

　　—

　　活性炭

　　—

　　—

　　1.0 g

　　1.0 g

　　蔗糖

　　30.0 g

　　20.0 g

　　20.0 g

　　20.0 g

　　琼脂

　　5.0 g～7.0 g

　　5.0 g～7.0 g

　　5.0 g～7.0 g

　　5.0 g～7.0 g

　　注

　　1：不同培养阶段培养基的pH均为5.2～5.8。

　　注

　　2：MS干粉培养基含有大量元素、微量元素和多种有机元素等。

　　注

　　3：多种维生素及微量元素合成药剂含有多种维生素、微量元素、有机成分等。

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　　6

　　B

　　B

　　附录B (资料性) 培养物异常表现及处理

　　表B.1给出了培养物异常表现及处理。

　　表

　　B.1 培养物异常表现及处理

　　培养阶段

　　培养物的异常表现

　　产生原因

　　处理

　　腋芽诱导培养

　　水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯

　　表面灭菌剂有效成分含量过大，灭菌时间过长，选用部位不当，采样时期不当

　　使用较温和的灭菌剂，降低灭菌剂浓度，减少灭菌时间，选用适宜部位，生长中期采样

　　侧芽长期不萌发

　　6-BA用量不足，温度不适宜

　　提高6-BA浓度，调整培养室温度

　　侧芽长出愈伤组织

　　选用腋芽过嫩，6-BA、NAA用量过大

　　生长中期采样，减少6-BA、NAA用量

　　丛生芽增殖

　　培养

　　芽分化量少，生长速度慢，个别出现徒长现象

　　6-BA浓度不足，温度偏高，光照不足

　　增加6-BA的浓度、或减少NAA用量，适当降低温度，光强增强到适宜光照

　　芽分化数量较多，生长慢，部分畸形，芽丛密集，过度微型化

　　6-BA用量过多，温度过高

　　减少6-BA用量或停用一段时间，适当降低温度

　　芽分化数量较少，芽畸形，形成愈伤组织

　　NAA用量偏高，温度偏高

　　减少NAA用量，适当降低温度

　　叶粗厚变脆

　　6-BA和NAA用量偏高

　　适当减少6-BA和NAA用量，避免叶接触培养基

　　再生芽的叶缘、叶面等处偶有不定芽

　　6-BA用量过高，或品种不适宜这种增殖方式

　　减少6-BA用量，分阶段利用其它增殖方式

　　丛生芽过于细弱，不适于生根和移栽

　　6-BA过多，温度过高，光照不足，转接不及时，培养空间小

　　减少6-BA用量，适当降低温度，延长光照时间，增加光照强度，及时转接，选用大的培养容器或减少接种芽量

　　幼芽生长无力，常有黄叶、死芽夹于丛生芽中，组织有水浸状，部分芽逐渐衰弱，生长停止

　　容器内气体状况恶化，乙烯含量高;转接不及时，养分供给不足;光合作用不足于维持自身生长;6-BA和NAA配比不适;无机盐浓度不当;培养物污染;温度不适

　　及时转接，加强光照，适当调整6-BA和NAA配比，调整无机盐浓度，去除污染，控制温度

　　幼芽淡绿，部分失绿

　　pH不适，铁、锰、镁元素配比失调，光照过强，温度不适

　　调整pH、母液或配方，控制光温条件

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　　7

　　表B.1 培养物异常表现及处理(续)

　　培养阶段

　　培养物的异常表现

　　产生原因

　　处理

　　生根培养

　　不生根

　　NAA浓度不适宜，用量过高或过低，pH不适，无机盐浓度不当等

　　调整NAA用量，调整pH，调整无机盐浓度及其种类

　　根部肿胀或畸形，根并联，苗发黄或死亡

　　NAA浓度不适，用量过高

　　适当降低NAA浓度