DB32/T 5193-2025 全血血清中全氟辛酸的测定液相色谱串联质谱法

　　全血血清中全氟辛酸的测定

　　液相色谱-串联质谱法

　　Determination of perfluorooctanoic acid in whole blood and

　　serum—Liquid chromatography‑tandem mass spectrometry

　　2025‑09‑10 发布2025‑10‑10 实施

　　DB3 2/T 5193—2025

　　前言……………………………………………………………………………………………………………Ⅲ

　　1 范围…………………………………………………………………………………………………………1

　　2 规范性引用文件……………………………………………………………………………………………1

　　3 术语和定义…………………………………………………………………………………………………1

　　4 原理…………………………………………………………………………………………………………1

　　5 试剂和材料…………………………………………………………………………………………………1

　　6 仪器和设备…………………………………………………………………………………………………2

　　7 样品…………………………………………………………………………………………………………3

　　8 分析步骤……………………………………………………………………………………………………3

　　9 方法的定量限和回收率……………………………………………………………………………………6

　　目 次

　　Ⅰ

　　DB3 2/T 5193—2025

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

　　起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由江苏省卫生健康委员会提出并组织实施。

　　本文件由江苏省卫生健康标准化技术委员会归口。

　　本文件起草单位：南京医科大学、生态环境部南京环境科学研究所、苏州市疾病预防控制中心。

　　本文件主要起草人：顾爱华、徐进、刘倩、吉贵祥、胡佳、郭文慧、陈秀、符祖强、倪普、储茅茅、梁梦园。

　　Ⅲ

　　DB3 2/T 5193—2025

　　全血/血清中全氟辛酸的测定

　　液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本文件描述了全血/血清中全氟辛酸(PFOA)的液相色谱-串联质谱测定方法。

　　本文件适用于人、啮齿类动物(如大鼠、小鼠等)全血/血清样本中全氟辛酸的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

　　件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

　　文件。

　　GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法

　　WS/T 661　静脉血液标本采集指南

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　全血/血清样本经含甲酸的乙腈溶液、正己烷和二氯甲烷萃取净化后，有机相氮吹至近干，复溶后上

　　机测定;采用液相色谱分离，质谱检测器检测，根据保留时间、特征离子丰度比定性，采用同位素内标法定

　　量分析。

　　5 试剂和材料

　　除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T 6682 规定的一级水。

　　5.1 试剂

　　5.1.1 甲酸(HCOOH)。

　　5.1.2 乙腈(CH3CN)。

　　5.1.3 乙酸铵(CH3COONH4)。

　　5.1.4 甲醇(CH3OH)。

　　5.1.5 正己烷(C6H14)。

　　5.1.6 二氯甲烷(CH2Cl2)。

　　5.1.7 标准物质：全氟辛酸(PFOA，C8HF15O2，CAS 号335‑67‑1)纯度≥98%。或使用市售有证标准

　　溶液。

　　5.1.8 同位素内标物质：全氟辛酸同位素内标(13C4‑PFOA，CAS 号960315‑48‑4)质量浓度为2 mg/L。

　　1

　　DB3 2/T 5193—2025

　　5.2 溶液配制

　　5.2.1 甲酸-乙腈溶液

　　移取2 mL 甲酸用乙腈定容至100 mL，混匀，配制成2% 甲酸‑乙腈溶液。

　　5.2.2 乙酸铵水溶液：c(CH3COONH4)=2 mmol/L

　　称取154 mg 乙酸铵，用水溶解，定容至1 000 mL，混匀。

　　5.2.3 乙腈-乙酸铵溶液

　　根据需要取适量乙腈和乙酸铵水溶液，按体积比1∶1 进行混匀。

　　5.2.4 标准储备溶液：ρ(PFOA)=100 mg/L

　　称取10.0 mg PFOA 标准物质，用甲醇溶解，定容至100 mL，混匀，避光，0 ℃~4 ℃冷藏可保存60 d，

　　使用前恢复至室温并摇匀。

　　5.2.5 标准中间溶液1：ρ(PFOA)=0.1 mg/L

　　移取适量PFOA 标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为0.1 mg/L 的标准中间溶液1。临用

　　现配。

　　5.2.6 标准中间溶液2：ρ(PFOA)=0.01 mg/L

　　移取适量PFOA 标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为0.01 mg/L 的标准中间溶液2。临用

　　现配。

　　5.2.7 内标工作溶液：ρ(13C4 ‑PFOA)=0.2 mg/L

　　将内标储备液按需要用甲醇溶解，混匀，避光，0 ℃~4 ℃冷藏可保存60 d。使用前恢复至室温，并摇匀。

　　5.3 材料

　　5.3 .1 离心管：15 mL、2 mL，聚丙烯材质。

　　5.3 .2 容量瓶：10 mL、100 mL，聚丙烯材质。

　　5.3 .3 进样瓶：2 mL，聚丙烯材质。

　　6 仪器和设备

　　6.1 电子天平：分度值不大于0.01 mg。

　　6.2 涡旋振荡器。

　　6.3 氮吹浓缩装置。

　　6.4 高速离心机：转速可达12 000 r/min。

　　6.5 超声波清洗仪。

　　6.6 低温冰箱：温度可达-20 ℃。

　　6.7 液相色谱‑串联质谱仪：液相色谱具备梯度洗脱功能，三重四极杆质谱仪配有电喷雾离子源，具备多

　　反应监测功能。

　　6.8 一般实验室常用仪器和设备。

　　2

　　DB3 2/T 5193—2025

　　7 样品

　　7 .1 样品采集和保存

　　全血/血清样品按照WS/T 661 的规定进行获取，样品如无法及时检测，全血样品应于2 ℃~8 ℃冰

　　箱保存，周期不超过7 d;血清样本应于-20 ℃冰箱中冷冻保存，保存周期不超过3 个月。

　　7 .2 试样的制备

　　7 .2.1 全血

　　取500 μL 全血于15 mL 离心管中，加入 20 μL 内标工作溶液，加入 1 mL 纯水稀释，涡旋混匀;加入1 mL

　　甲酸‑乙腈溶液涡旋混匀，超声 5 min，加入1 mL 正己烷和 1 mL 二氯甲烷，涡旋萃取 1 min，4 000 r/min

　　转速离心 5 min，转移上层全部有机相至新的离心管中;重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集

　　的萃取液在 40 ℃水浴温度下氮吹至近干，用 200 μL 乙腈‑乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至 2 mL

　　离心管中，12 000 r/min 离心5 min，取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。

　　7 .2.2 血清

　　取 200 μL 血清于 15 mL 离心管中，加入 20 μL 内标工作溶液，涡旋混匀;加入 1 mL 甲酸‑乙腈溶液涡

　　旋混匀，超声 5 min，加入 1 mL 正己烷和 1 mL 二氯甲烷，涡旋萃取 1 min，4 000 r/min 转速离心 5 min，转

　　移上层全部有机相至新的离心管中;重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集的萃取液在 40 ℃水浴

　　温度下氮吹至近干，用 200 μL 乙腈-乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至 2 mL 离心管中，12 000 r/min

　　离心 5 min，取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。

　　8 分析步骤

　　8 .1 仪器参考条件

　　8 .1.1 液相色谱柱：C18 色谱柱，柱长100 mm，内径2.1 mm，粒径1.8 μm)，或其他等效色谱柱。

　　8 .1.2 流动相：流动相A 为乙腈;流动相B 为乙酸铵水溶液。

　　8 .1.3 流速：400 μL/min。

　　8 .1.4 柱温：35 ℃。

　　8 .1.5 进样体积：5.0 μL。

　　8 .1.6 离子源模式：ESI 负离子模式;气帘气压力 35.0 psi;喷雾电压-4 500 V;雾化温度 550 ℃;雾化气

　　压力 55 psi;辅助气压力 60 psi。

　　8 .1.7 梯度洗脱程序见表1。

　　表1　梯度洗脱程序

　　0.00

　　1.00

　　5.00

　　7.00

　　10

　　10

　　90

　　90

　　90

　　90

　　10

　　10

　　时间/min 流动相A/% 流动相B/%

　　3

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　　8.00

　　10.0

　　10

　　10

　　90

　　90

　　表1　梯度洗脱程序 (续)

　　时间/min 流动相A/% 流动相B/%

　　8 .1.8 全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件见表2。

　　表2　全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件

　　组分

　　全氟辛酸

　　全氟辛酸内标

　　母离子m/z

　　413.0

　　417.1

　　去簇电压/V

　　-48

　　-70

　　子离子m/z

　　368.9

　　168.9

　　372.0

　　碰撞能量/eV

　　-16

　　-25

　　-20

　　8 .2 标准曲线绘制

　　移取适量PFOA 标准中间溶液1 和标准中间溶液2 于 2 mL 进样瓶中，并分别加入 10 μL 同位素内

　　标物质，用乙腈-乙酸铵溶液稀释制得系列标准溶液(现配现用)。各溶液全氟辛酸的质量浓度依次为

　　0.5 μg/L、1.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L，内标物质量浓度均为 20.0 μg/L。将系列

　　标准溶液按高效液相色谱和质谱参考条件进行测定，以全氟辛酸质量浓度(μg/L)为横坐标、全氟辛酸峰

　　面积与其对应的内标峰面积比值为纵坐标，建立标准曲线线性回归方程。全氟辛酸及其内标溶液的多反

　　应监测色谱图见图1 和图2。

　　f 5

　　f 5

　　f 5

　　f 5

　　DQT

　　K NJO

　　1'0"

　　图1　全氟辛酸溶液的多反应监测色谱图

　　4

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　　f 5

　　f 5

　　f 5

　　f 5

　　DQT

　　K NJO

　　13$4 1'0"

　　图2　全氟辛酸标准溶液的多反应监测色谱图

　　8 .3 试样测定

　　按本方法仪器条件测定试样溶液，试样色谱峰的保留时间与对应标准色谱峰的相对误差应控制在

　　±5% 范围内。在扣除背景的质谱图中，所有特征离子均被检出，且试样定性离子丰度/定量离子丰度的

　　比值与对应标准物质中定性离子丰度/定量离子丰度的比值满足表3 规定的要求，则可判定试样含全氟

　　辛酸。

　　表3　相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度/%

　　最大允许偏差/%

　　≤10

　　±50

　　>10~20

　　±30

　　>20~50

　　±25

　　>50

　　±20

　　记录目标化合物定量离子与内标化合物色谱峰的峰面积，采用内标法进行定量分析。试样溶液中被

　　测物的响应值应位于标准曲线的线性范围内，超出范围的试样需稀释后重新测定。

　　8 .4 空白试验

　　除不加试样外，均按照与试样相同的制备和分析步骤进行测定。

　　8 .5 结果计算

　　全血/血清中全氟辛酸含量按公式(1)计算，计算结果需扣除空白值。

　　ρ =

　　ρ1 × V1

　　V …………………………( 1 )

　　式中：

　　ρ ——样品中PFOA 的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);

　　ρ1 ——进样质量浓度，单位为微克每升(μg/L);

　　V1 ——样品的定容体积，单位为微升(μL);

　　V ——取样体积，单位为微升(μL)。

　　5

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　　9 方法的定量限和回收率

　　9.1 定量限

　　全血取样量为 500 μL，定容体积为200 μL 时，全氟辛酸的定量限为0.5 μg/L。

　　血清取样量为 200 μL，定容体积为200 μL 时，全氟辛酸的定量限为0.5 μg/L。

　　9.2 回收率

　　血清中全氟辛酸的添加质量浓度为1.0 μg/L 时，回收率为88.5%~112%，相对标准偏差为3.8%~9.8%;

　　添加浓度为10.0 μg/L 时，回收率为79.7%~96.4%，相对标准偏差为5.5%~7.2%。

　　全血中全氟辛酸的添加质量浓度为1.0 μg/L 时，回收率为90.5%~93.3%，相对标准偏差为3.0%~

　　3.8%;添加浓度为10.0 μg/L 时，回收率为94.0%~94.8%，相对标准偏差为4.9%~5.6%。